국내 임상검사실에서 질량분석법으로 시행하는 면역억제제 약물농도검사의 검사지침서 조사 = A Survey of Standard Operating Procedures for Measuring Immunosuppressant Drug Concentrations Using Mass Spectrometry in Korean Clinical Laboratories

국문 초록 (Abstract)

배경: 액체 크로마토그래피-탠덤 질량분석법(Liquid chromatogra- phy-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)은 전혈 내 면역억제 제 정량법 중 높은 정확도와 다중검사 가능으로 인해 선호되는 검 사법이다. 그러나 임상검사실에서의 도입은 분석법 개발 및 검증의 복잡성 때문에 특히 기술 전문성이 제한된 기관에서는 어려움이 따를 수 있다. LC-MS/MS 기반 검사의 보다 폭넓은 도입을 촉진하 기 위해, 대한임상화학회 임상질량분석위원회는 국내 검사실에서 사용중인 LC-MS/MS 기반 면역억제제 분석법의 검사지침서를 수 집 및 분석하였다.
방법: LC-MS/MS 기반 면역억제제 검사를 독자적으로 개발하고 검증한 7개 기관의 검사지침서를 수집하여 분석하였다. 주요 항목 으로는 검체 채취, 시약, 검체 전처리, 액체 크로마토그래피 및 질 량분석법 관련 조건이 포함되었다.
결과: 타크로리무스 , 사이클로스포린 A, 시롤리무스, 에베로리무 스 등 4종의 면역억제제를 모두 분석하는 기관은 4개였으며, 나머 지 기관은 2-3종을 측정하였다. 모든 기관은 EDTA로 항응고 처리 된 전혈을 사용하였으며, 단백질 침전을 위해 ZnSO4와 유기용매 를 활용하였다. 역상 크로마토그래피법으로 C18 칼럼과 그래디언 트 용출 방식을 가장 일반적으로 사용하였다. 모든 기관이 시판 보 정물질 및 정도관리물질을 사용하였으며, 내부표준물질은 기관마 다 달랐으나 사이클로스포린 D와 ascomycin이 가장 많이 사용되 었다. LC-MS/MS 장비 및 분석 조건은 기관 간 상이하였으나, 모두 전자분무 이온화법(electrospray ionization)을 사용하고, 다중반 응 모니터링법으로 암모늄 부가이온을 분석하였다.
결론: 본 연구 결과는 면역억제제 치료 약물 모니터링을 위한 현재 LC-MS/MS 분석법을 종합적으로 요약한 것으로 , 향후 LC-MS/MS 기반 면역억제제 정량검사를 도입하거나 기존의 검사법을 개선하 고자 하는 임상검사실에 실질적인 참고자료로 활용될 수 있을 것 이다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Background: Liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) is preferable for quantifying immunosuppressants in whole blood because of its high accuracy and multiplexing capabilities. However, its implementation in clinical laboratories can be hindered by the complexity of method development and validation, particularly for practitioners with limited technical expertise. To facilitate broader adoption of LC-MS/MS- based testing, the Clinical Mass Spectrometry Committee of the Korean Society for Clinical Chemistry conducted a survey to collect and analyze standard operating procedures (SOPs) currently used for LC-MS/MS-based immunosuppressant assays.
Methods: SOPs from seven institutions, each with independently developed and validated LC-MS/MS assays for immunosuppressants, were col- lected and analyzed. Key categories included sample handling, reagent preparation, sample pretreatment, and liquid chromatographic and mass spectrometry parameters.
Results: Four institutions measured all four immunosuppressants (tacrolimus, cyclosporine A, sirolimus, everolimus), while others measured two or three. All laboratories used EDTA-anticoagulated whole blood and employed protein precipitation with ZnSO4 and organic solvents. Re- versed-phase chromatography using a C18 column with gradient elution was most commonly used. All institutions used commercial calibrators and quality controls. Internal standards varied, but cyclosporine D and ascomycin were most frequently used. While LC-MS/MS instruments and analytical conditions varied, all institutions employed electrospray ionization and monitored ammonium adducts in multiple reaction monitoring. Conclusions: These findings provide a comprehensive summary of current LC-MS/MS practices for immunosuppressant monitoring and may serve as a practical reference for laboratories to implement or optimize LC-MS/MS-based immunosuppressant assays.