pKT230 벡터를 이용한 Pseudomonas sp. P20 2,3-Dihydroxybiphenyl Dixygenase 유전자의 클로닝 = Cloning of 2,3-Dihydroxybiphsnyl Dioxygenase Gene from Pseudomonas sp, P20 Using pKT230 Vector

국문 초록 (Abstract)

Biphenyl과 4-chlorobiphenyl을 분해하는 자연계 분리 균주인 Pseudomonas sp. P20의 chromosomal DNA로부터 pBluescript SK(+)를 이용하여 pcbABCD 유전자를 클로닝하여 재조합플라스미드 pCK1을 제조하였고, 또 pcbCD 유전자를 포함하여 pCK102을 제조하였다. 방향족 탄화수소 화합물의 생분해는 벤젠고리의 개환 과정이 중요하기 때문에, 2,3-dihydroxybiphenyl(2,3-DHBP)의 벤젠고리의 개환에 관여하는 2,3-DHBP dioxygenase(2,3-DHBD) 유전자를 pKT230 벡터를 이용하여 pCK102로부터 클로닝하였다. EcoRI으로 절단한 pCK102와 pKT230 벡터를 ligation시켜 13.8 kb의 hybrid plasmid pKK1을 제조하였다. 2,3-DHBD 유전자를 포함하는 pKK1을 E. coli XL1-Blue에 형질전환시켜 E. coli KK1 재조합 균주를 얻은 후, 2,3-DHBD의 활성을 측정하였다. E. coli KK1의 2,3-DHBD의 효소활성은 pBluescript SK(+)를 이용하여 제조한 재조합 균주인 E. coli CK102의 효소활성과 유사하였으나, Pseudomonas sp. DJ-12와 Pseudomonas sp. P20과 같은 자연계 분리균주보다 훨씬 높았다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Pseudomonas sp. P20 isolated from the polluted environment is capable of degrading biphenyl and 4-chlorobiphenyl. The pcbABCD genes responsible for degradation of biphenyl and 4-chlorobiphenyl were cloned using pBluescript SK(+) from the chromosomal DNA of Pseudomonas sp. P20 to construct pCK1 and pCK102, harbouring pcbABCD and pcbCD, respectively. The 2,3-DHBP dioxygenase gene, pcbC, was cloned again from pCK102 by using pKT230 which is known as a shuttle vector and pKK1 hybrid plasmid was constructed. The E. coli KK1 transformant obtained by transforming the pKK1 into E. coli XL1-Blue showed 2,3-DHBP dioxygenase activity. The specific 2,3-DHBP dioxygenase activity of E. coli KK1 was similar to that of the E. coli CK102, but much higher than those of the natural isolates, Pseudomonas sp. DJ-12 and Pseudomonas sp. P20