흰쥐 채 내에 함유된 신경전달물질로서의 아미노산 분석 = Analysis of Amino Acid as Neurotransmitter in Fimbria of the Rat
저자
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
1994
작성언어
Korean
KDC
040.000
자료형태
학술저널
수록면
401-407(7쪽)
제공처
뇌 해마의 원심뉴론인 채(Fimbria)에 대한 해마의 영향을 알아보기 위하여 대뇌피질을 거쳐 양쪽 해마를 제거한 해마군과 해마를 덮고 있는 대뇌피질 부분만을 제거한 대뇌피질 대조군, 그리고 정상 대조군을 마련한 다음, HPLC(high perfor-mance liquid chromatograph) 를 이용하여 OPA(ortho-phthalaldehyde) pre-column 유도체화법으로 채 조직의 아미노산 함량을 측정하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
1)Aspartate농도는 해마군의 값이 두 대조군의 값에 비하여 모두 유의하게 감소하였고(해마군 대 정상 대조군 : P<0.001, 해마군 대 대뇌 괴질 대조군 : P<0.01), 두 대조군 사이에는 유의성 있는 차이가 없다.
2)Glutamate의 농도도 해마군의 값이 두 대조군의 값에 비하여 모두 유의하게 감소하였고(해마군 대 정상 대조군 : P<0.001, 해마군 대 대뇌피질 대조군 : P<0.001), 두 대조군 사이에는 아무런 차이가 없다.
3)Alanine의 농도는 해마군의 값과 대뇌피질 대조군의 값 사이에서만 유의한 감소를 보였고, 해마군과 정상 대조군 사이와 두 대조군 사이에는 이렇다 할 차이가 없다.
4)Serine, glycine 및 threonine의 농도는 세무리 사이에 모두 차이가 없다.
이상의 실험 결과를 볼 때 채는 해마의 원심뉴른으로서 해마의 영향을 직접 받아 aspartate 및 glutamate를 흥분성 전달 물질로 사용하고 있다고 생각된다.
In order to know that the free amino acids-glutamate, aspartate and other free amino acids might function as hippocampal transmitters we analyzed the amino acid contents of fimbria tissue in hippocampectomized rats by high performance liquid chromatography(HPLC). Twenty nine female rats, weighing 230g at the time of operation, were divided into 3 groups. Hippocampal tissue was removed as follows. Under chloral hydrate(20%, 2㎖/㎏, i.p.), a hole with a diameter of about 3㎜ was made in each parietal bone about 4㎜ lateral to the sagittal suture, and 4㎜ rostral to the lambda suture. Thee exposed cortical tissue on each side was removed, and then as much of thee hippocampal tissue as possible on both sides was sucked out using No.21 gauge suction tips. Sepecial care was taken not to damage the neighboring brain structures. This preparation served as the hippocampectomized animal (hippocampal group). The cortical control animal received the same surgery short of hippocampal ablation(cortical control). The normal rats served as normal control group. After a survival period of 7 days, the animal were sacrificed by decapitation. Two to three milligrams of tissue were removed from the fimbria in one side of the brain. The glutamate, aspartate and other free amino acid content were estimated using HPLC. The tissue samples were homogenized in 200㎕ of 0.5M perchloric acid in 1mM EDTA with ground-glass homogenizers. After centrifugation at 3,500rpm for 15 min., an aliquot of 80㎕ supernatant was neutralized with 40㎕ of 2M KHCO3, and then centrifuged again at 3,500rpm for 10 min. An aliquots of 20㎕ was taken and diluted with 350㎕ of R1 bottle (10㎕ of β-mercaptopropionic acid in 10㎖] of 100mM sodium borate buffer(pH 9.1) and 350㎕ of R2 bottle(10㎖ of OPA solved in 3㎖ ethanol was diluted with 10㎖ of 100mM sodium borate buffer(pH 9.1). Then 400㎕ of the resulting sample was injected with SIL-6B auto injector. LC-9A liquid chromatograph, FLD-6A fluorescence detector, CTO-6A column oven and SCL-6B system controller was employed. We used OPA pre-column derivatization method. Peak areas were automatically integrated and calculated by C-R6A chromatopac.
Aspartate contents decreased significantly in the hippocampal group compared to the normal control group(Mann-Whitney U test, P<0.001) and the cortical control group(P<0.01), while there was no significant difference between the 2 control groups. Glutamate contents decreased significantly in the hippocampal group compared to the normal control group(P<0.001) and the cortical control group(P<0.001), while there was no significant difference between the 2 control groups. In serine, glycine and threonine, the differences among 3 group values were nonsignificant. Alanine contents decreased significantly in the hippocampal group compared with the value obtained from the cortical control group(P<0.01), while the difference between the hippocampal group and normal control group values and between the 2 control group values were nonsignificant.
It is inferred from the above mentioned results that excitatory transmitter substances employ the free amino acids glutamate and aspartate in fimbria, and that fimbria may exert a direct effect on the hippocampus.
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