SCOPUS
KCI등재
Glucoamylase 분비신호서열의 돌연변이에 의한 효모에서 세균의 Endo-1,4-β-D-glucanase의 분비능 증진 = Improvement of Bacterial Endo-1,4-β-D-glucanase (CMCase) Secretion in Yeast by Mutagenesis of Gluco-amylase Signal Sequence
저자
이준원 (생명공학 연구소) ; 강대욱 (생명공학 연구소) ; 김보연 (생명공학 연구소) ; 오원근 (생명공학 연구소) ; 민태익 (생명공학 연구소) ; 이상원 (생명공학 연구소) ; 변유량 (연세대학교 생명공학과) ; 안종석 (생명공학 연구소)
발행기관
학술지명
한국미생물·생명공학회지 (Korean Journal of Microbiology and Biotechnology)
권호사항
발행연도
2000
작성언어
Korean
주제어
KDC
570.6
등재정보
SCOPUS,KCI등재
자료형태
학술저널
발행기관 URL
수록면
195-201(7쪽)
제공처
소장기관
S. diastaticus에서 이종단백질의 분비에 대한 GSP의 이용성을 증대시키기 위하여 CMCase 구조 유전자를 GAL7 terminator, GAP promoter, 그리고 STA 유전자의 변이형 GSP (ml : Pro^-18→Leu^-18, m2 : Tyr^-13→Leu^-13, m3 : Ser^-9→Leu^-9, m4 : Asn^-5→Pro^-5)에 재조합하여 secretion vector를 제작하였다. 변이형 m1, m2, 그리고 m3 은 야생형보다 아미노 말단과 소수성 구역에 더 높은 소수성을 가지도록 하였다. 변이형 m4은 극성 아미노산을 제거하고 단백질의 2차 구조를 파괴하는 proline으로 대체하였다. 배양시간에 따른 CMCase 활성측정과 Western blot 분석 결과 변이형 m4를 제외한 모든 변이형의 경우 Leu으로 대체된 변이형 GSP에 의한 CMCase의 분비가 본래의 야생형 GSP에 의한 분비보다 높았으며 특히 m2와 m3에서 약 2배 높았다. 효모 숙주 세포를 제외한 재조합 플라스미드를 가지고 있는 야생형과 변이형들의 모든 효모세포에서 당쇄로 인하여 증가된 이종의 분자량이 큰 단백질들이 (90-100 kDa) 분비되었다. 효모 세포내에서 발현된 CMCase는 약 60, 52, 그리고 46 kDa의 분자량을 보였다.
Glucoamylase of Saccharomyces diastaticus is produced as a large precursor composed of signal peptide (21 amino acid residues), Thr and Ser-rich region and functional glucoamylse. To evaluate the utility of the glucoamylase siganl peptide (GSP) for the secretion of foreign proteins, four types of GSP mutants (ml : Pro^-18→Leu^-18, m2 : Tyr^-13→Leu^-13, m3 : Ser-9→Leu^-9, m4 : Asn^-5→Pro^-5) were constructed and secretion efficiency of each mutant was compared with that of native GSP by the expression and secretion of Bacillus subtilis CMCase under the control of GAP promoter and GAL7 terminator in S. diastaticus. Mutants 1,2 and 3 had a higher hydrophobicity than wild type GSP in N-terminal domain and hydrophobic domain. In mutant 4, a polar amino acid was replaced by a helix - breaking Pro residue. CMCase activity assay and Western blot analysis revealed that CMCase secretion by GSP mutants replaced by Leu were increased compared with native GSP. In the case of m2 and m3, the substitution of Leu for Tyr^-13 and Ser^-9 in the hydrophobic region resulted in a twofold increase in the extracellular CMCase activity.
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