DPO based Multiplex PCR for detecting pathogens causing canine infectious respiratory disease and its usefulness for analyzing epidemiology of canine influenza H<sub>3</sub>N<sub>8</sub>, canine H<sub>3</sub>N<sub>2</sub>, pandemic H1N1 = DPO based Multiplex PCR for detecting pathogens causing canine infectious respiratory disease and its usefulness for analyzing epidemiology of canine influenza H<sub>3</sub>N<sub>8</sub>, canine H<sub>3</sub>N<sub>2</sub>, pandemic H1N1
저자
( Heejun Yook ) ; ( Woonsung Na ) ; ( Minjoo Yeom ) ; ( Aram Kang ) ; ( Daesub Song )
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
2017
작성언어
Korean
자료형태
학술저널
수록면
231-231(1쪽)
제공처
Introduction: Canine infectious respiratory disease (CIRD) is one of the most common contagious disease and spread worldwide in dog population. Numerous bacteria species and viruses contribute CIRD with synergistic co-infection in host leading clinical symptoms of flu-like illnesses such as dry coughing and sneezing, which alone limits the differential diagnosis. To provide an appropriate treatment by differential diagnosis, it is required that high sensitive and specific diagnostic system to detect various pathogens simultaneously. In this study, we have designed novel multiplex PCR(mPCR) for differential diagnosis of threatening pathogens that cause CIRD: Bordetella bronchiseptica, canine distemper virus(CDV), canine influenza virus H3N8 (cH3N8), canine influenza H3N2 (cH3N2), and pandemic influenza virus H1N1 (pH1N1).
Methods: Dual priming oligonucleodtide(DPO) system was used, in which contains stabilizing priming region, determining region and polydeoxyinosine linker, to enhance sensitivity and specificity by reducing non-specific amplicon. Initial sequence analysis and securing the conservancy for the sequences were conducted using Bio Edit ver. 7.0, and primers for mPCR were designed using Primer-BLAST (NCBI)
Results: The five different pathogens of CIRD were discriminated by 100bp size difference of each PCR product according to their target sequence size in gel electrophoresis, which indicates specific primer pairs amplifies target template, respectively. Various annealing temperature were applied and the optimal reaction was determined to 57℃.
Conclusion: In this study, we have developed a DPO based novel multiplex PCR that discriminate five CIRD pathogens concurrently. This provides exact diagnosis of CIRD and supports an appropriate treatment to infected dogs. Especially, the mPCR can differentiate three kinds of influenza viruses to which dogs are susceptible, and this could be useful tool for surveillance study of influenza viruses in dog population. Therefore, this multiplex PCR can offer powerful diagnosis tool and effectively help both treatment and surveillance of CIRD.
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