Purification and Characterization of Plasminogen Activator Secreted by Human Melanoma Cell G-361
저자
정광회 ; 김경호 ; 김유삼 ; Chung, Kwang-Hoe ; Kim, Kyong-Ho ; Kim, Yu-Sam
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
1985
작성언어
English
자료형태
학술저널
수록면
253-258(6쪽)
제공처
인체 melanoma 세포 G-361 을 세포배양하였을 때 분비된 plasminogen activator를 zinc chelate-Sepharose 6B 흡착 크로마토그라피법, Concanavalin-A agarose 흡착 크로마토그라피법, Sephadex G-150 젤 여과법등을 사용하여 정제하였고 그 특성을 조사하였다. 정제된 plasminogen activator는 SDS-polyacrylaminde gel에서 전기이동한 결과 하나의 major band을 나타냈고, 그 분자량은 약 71,000 dalton이었다. 이 plasminogen activator 가 가장 큰 활성을 나타내는 최적 pH는 8.0이었고, 열에 대하여는 매우 안정하였다. 또한 diisopropyl fluorophosphate 처리에 의하여 활성이 억제되는 것으로 보아 일종의 serine protease라는 사실이 확인되었으며, 인위적으로 만든 fibrin clot에 대한 친화성이 urokinase와 비교하였을 때 약 9배 높았다. Tissue plasminogen activator를 항원으로 하여 토끼로 부터 항체를 얻었고 이 항체를 가지고 melanoma 세포 배양액에서 추출한 plasminogen activator와 Ouchterlony double immunodiffusion한 결과 하나의 precipitation band를 얻었다. 그러고 이 항혈청은 melanoma plasminogen activator의 활성을 90% 이상 억제하였다. 그러나, tPA에 대한 항혈청은 urokinase와는 전혀 면역학적으로 반응하지 않았다.
더보기Plasminogen activators are produced by many transformed cells and by a few normal cell lines and tissues. Human melanoma cell line G-361 was cultured and plasminogen activator was purified from the culture medium by the column chromatography on zinc chelate-Sepharose 6B, ConA-agarose, and Sephadex G-150 superfine. The molecular weight of the purified plasminogen activator was determined to be about 71,000. The maximum activity of the activator showed at about pH 7.5. The fibrinolytic activity of the plasminogen activator was inhibited by diisopropyl flurophosphate. The melanoma plasminogen activator was appeared to be immunologically identical with the tissue plasminogen activator, but unrelated to urokinase. The melanoma plasminogen activator bound significantly to fibrin clots in vitro, while urokinase did not.
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