식중독균 항원(Salmonella typhimurium)에 의한 계란항체(IgY) 생산성과 항체특성 및 항균효과 = Productivity, Properties and Antimicrobial Activity of Egg Yolk Antibody(IgY) against Food Poisoning Bacteria (Salmonella typhimurium)
본 연구는 식중독균을 항원으로 하여 산란계에 면역시킨 후 계란 항체(IgY)의 생산 가능성을 검토하고, 그 항체의 특성과 항균성을 조사하고자 실시하였다. 그 방법으로는 항원으로 사용된 Salmonella typhimurium(ATCC 14028) 등을 incomplete Freund's adjuvant와 동량으로 혼합하여 면역시킨 후 10주간 생산된 계란을 수집하여, 계란항체(IgY)의 분리 및 식중독균 항원에 대한 항체의 특성, 항균성, 생화학적 특성을 측정하였다. S. typhimurium 항원에 면역된 산란계의 계란항체(IgY)생산 및 증가를 측정한 결과, 산란계가 이들 항원에 면역반응을 일으켜 2주 후 혈청과 난황에서 각각 normal군에 비하여 뚜렷한 항체가 생성능을 보였으며, 혈청내의 IgG생성에 비하여 계란항체(IgY)의 생성이 다소 낮은 것으로 나타났다. 혈청 및 난황내의 단백질 함량은 normol군에 비하여 약간 높은 경향을 나타내어 산란계의 혈청 및 난황내의 단백질이 이들 항원에 의하여 증가하는 것으로 나타났다. DEAE-Sephacel column을 통과한 fraction은 두 개의 peak를 나타내었다. 각 fraction의 IgY농도를 ELISA법으로 확인한 결과 두 번째 peak에서 대부분 측정되었다. 분리 정제된 IgY의 분자량을 SDS-polyacrylamide 전기영동법으로 측정한 결과, heavy chain 72∼75KD, light chain 30∼40KD정도였다. Anti-S. typhimurium 항체의 온도에 대한 활성은 60℃에서 30분 가열시 91.5%, 65℃에서 15분 가열시 각각 73.2%의 활성도를 나타내었으며, 80℃에서 15분간 가열시는 거의 활성이 없는 것으로 나타났다. pH에 대한 안정성은 pH 7부터 pH 4까지는각각 98.7%의 활성도를 유지하다가 pH 3부터 급격히 감소하여, pH 2에서는 9.6%로 거의 활성도를 나타내지 않았다. 항균활성을 응집가, 생균수, disc diffusion susceptibility test 등으로 측정한 결과 anti-S. typhimurium 항체의 항균활성도는 매우 미약하게 나타났다. 이상의 결과에서, 본 실험에서 사용된 IgY는 항원에 대한 특이성 및 생화학적 특성 등을 고려해 볼 때 앞으로 식중독균 제거 및 예방 치료뿐만 아니라 식품산업 소재, 각종 질병예방을 위한 의약품 소재, 연구용 kit와 진단용 kit 및 축산분야 등 여러 분야에 응용될 수 있으리라 기대된다.
This study was carried out to investigated to get a industrial information from discussion about productive a possibility if IgY antibody, antimicrobial activity and properties of IgY antibody in egg yolk. Immunoglobulin Y in egg yolk and immunoglobulin G in serum were obtained from gens which were immunized with Salmonella typhimurium(ATCC14028). These antibody titers were evaluated in serum and egg yolk by ELISA. After the initial immunization the anti-Salmonella typhimurium IgY antibody level gradually were decreased from firth week to tenth week. On the other hand, the antibody level in the serum were increased from the first week, reaching its peak in the sixth week. The residual antibody activities of IgY were 91.5% after heating for 30min at 60℃. At the same time, were 73.2% after heating 15min at 65℃ and decreased vapidly at 70℃ and little antibody activity was left after heating for 15min at 80℃. When the prepared IgY was stable from pH 7 to 4 and remained to 69.8% at pH 3, respectively.
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