본 연구에서는 도살장에서 도살되는 한우의 난소를 적출하여 난소로부터 미성숙 난포란을 회수하여 체외에서 성숙한 난자를 동결정액과 정소상체미부 정액을 처리 방법에 따른 수정 및 체외발달에 미치는 영향을 조사하고자 본 실험을 수행하였다.
도살장에서 도살된 한우의 난소를 채취하여 체외성숙을 시킨 다음 한우 동결정액을 융해하여 B. O.배양액으로 원심분리를 2∼3회 반복하여 동해방지제를 제거한후 CO_2 incubator에서 0∼2시간 동안 swim-up을 유도하였다. 정소상체미부정자는 도축장에서 도살 직후 정소를 채취하여 체외수정에 사용하였다. 체외수정은 수정용 B. O.배양액 80∼100ul 당 10∼15개의 난자를 옮겨 정자의 최종농도가 2×10 exp (6) sperms/ml이 되게 첨가하여 약 24시간동안 CO_2 incu bator에서 수정을 유도하였다. 체외수정이 이루어진 수정란을 회수하여 10% FCS가 첨가된 TCM-199 배양액으로 4-5회 세척하여 monolayer를 형성하고 있는 난관상피세포와 공배양을 시키면서 48시간 간격으로 신선한 배양액으로 교환하면서 수정란의 체외발달을 유도한 결과는 다음과 같다.
체외수정율은 정소상체미부 정자를 사용하였을 때가 66.1%로서 동결정액을 사용하였을 때의 51.3% 보다는 유의적(P<0.05)으로 높았으며, 배반포로의 발달율은 각각 19.6 및 14.3%으로서 이들간에 유의적(P<0.05)인 차이가 없었다.
swim-up처리 시간에 따른 수정율은 59.3∼63.4%의 수정이 이루어져 swim-up처리 시간에 따른 수정율은 유의적(P<0.05)인 차이가 없었으며, 체외수정란의 배반포로의 발달율도 13.6∼19.3%가 배반포로 발달하였으나 이들간에 유의적(P<0.05)인 차이는 없었다.
The ovaries of Korean native cow or heifers were obtained from a slaughter house and kept on 28∼30℃ and transported to laboratory within 2 hrs. The follicular oocytes were collected follicles. The oocytes were matured in vitro for 24 hrs. in TCM-99 supplemented with 35ug/ml FSH, 10ug/ml LG, 1ug/ml estradiol-17 and granulosa cells at 39℃ under 5% CO_2 in air.
The caudal epididymis of Korean native bulls were obtained from a slaughter house and transported to laboratory within 30 minutes. Swim-up of collected spermatozoa and Freezing sperm was layered under 2ml fertilization B. O. medium in two tissue culture tubes and held at a 45℃ angle for 0∼2 hour. They were fertilized in vitro by freezing sperm treated with heparin for 24 hrs., and then the zygotes were co-cultured in vitro with bovine oviductal epithelial cells for 7 to 9 days.
The cleavage rate of matured oocytes was significantly(P<0.05) higher after in vitro fertilization in caudal epididyms(66.1%) than freezing sperm(513%). Similarly, the proporation of cleaved zygotes that developed to blastocysts was 19.6% and 14.3% respectively. The cleavage rate and in vitro developmental rate in swin-up period of freezing sperm was similar(59.3∼63.4% and 13.6∼19.3%).
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