강력한 발암성 물질인 Aflatoxin 화합물 중 독성이 가장 강한 AFB₁의 온도와 상대습도 변화에 따른 생성량을 조사하기 위하여 포도에 Aspergillus flavus KCCM 35078 균을 접종하여 온도는 26℃, 30℃, 34℃, 상대습도는 각각 50%, 60%, 70%, 80%,그리고 배양시간은 72(3일), 96(4일), 120(5일), 144(6일), 168시간(7일) 동안 정치 배양하였다.
AFB₁을 Column Chromatography로 정제하였고, TLC를 이용하여 분리하였으며, HPLC와 UV/VIS Spectrophotometer를 사용하여 정량분석 하였다.
분석결과 30℃, 상대습도 80%, 배양시간 168시간(7일) 일 때, 최대 생성량을 보였으며, HPLC로 정량한 경우 24.99ppm, UV/VIS로 정량한 경우 26.84ppm으로 감도의 차이를 보였다.
또한, HPLC와 UV/VIS를 이용하여 정량 분석한 결과에 의하면 약간의 감도의 차이를 보였지만 최대의 생성량은 30℃, 상대습도 80% 및 배양시간 168시간(7일) 이었으며, 최소의 생성량은 26℃, 상대습도 50% 및 배양시간 72시간(3일)일 때이었다. 따라서 온도와 상대습도 변화가 균 성장 및 AFB₁의 생성량에 큰 영향을 주었다.
AFB₁의 구조는 각각 질량분석 분광기(Mass), 수소 핵자기 공명 분광기(¹H-NMR) 및 적외선 분광(I.R.)를 이용하여 확인하였다.
Aflatoxin B₁(AFB₁) was known to have the strongest poisonous character out of Aflatoxin compunds. To search the production of AFB₁according to the change of temperature and relative humidity, grape inoculated with Aspergillus flavus KCCM 35078 was incubated at 26℃, 30℃, 34℃ and at relative humidity 50%, 60%, 70%, 80% and for incubation time 72. 96, 120, 144, 168 hours.
AFB₁ was refined by using Column Chromatography and separated by using Thin Layer Chromatography(TLC). And then it was quantitatively analyzed by using High Performance Liquid Chromatography(HPLC) and Ultra Violet/Visible Spectrophotometer(UV/VIS).
The measuring result shows that the highest production appeared at 30℃, relative humidity 80%, and incubation time 168(7 days) hours. The result shows difference of sensitivity that quantitative analysis by using HPLC was 24.99ppm and using UV/VIS was 26.84ppm.
The result of the Quantitive analysis by HPLC and UV/VIS shows a little difference of sensitivity. However, the highest production was appeared at 30℃, relative humidity 50% and incubation time 72(3 days) hours and the lowest production was appeared at 26℃, relative humidity 50%, and incubation time 72(3 days) hours.
Like that, the change of temperature and relative humidity influenced much the production of AFB₁ and the growth of culture.
The structure of AFB₁ was identified by using instrumental analysis methods of
Mass, ¹H-NMR, IR respectively.
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