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바이오센서 세포 제작을 이용한 세포 아데노신 삼인산 방출의 측정 = Measurement of Cellular ATP Efflux by Establishment of Biosensor Cells
저자
손민정 (Chungnam National University) ; Qui Ahn Le (Chungnam National University) ; 김준철 (Chungnam National University) ; Kyoung-Hee Kim (Chungnam National University) ; 우선희 (충남대학교)
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2019
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Korean
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In this study, we established a biosensor cell that can directly respond to ATP in order to measure ATP release from a single cell in real-time with high time resolution. We made HEK293 cells overexpressing P2X7 purinoceptors, the ATP-gated cation channel, with green fluorescence proteins (GFPs). Overexpression of P2X7 receptors was confirmed by reverse transcription-polymerase chain reaction, immunoblotting method, and fluorescence microscopy. In addition, the overexpression of P2X7 receptors was functionally confirmed by measuring ATP-induced cation current in these cells using whole-cell patch clamp technique. Application of ATP-containing external solutions produced inward currents at −70 mV in P2X7-expressing HEK293 cells, in a concentration-dependent manner with an EC50 of 31.2 µM. Maximal P2X7 inward current (14.2 ± 1.76 pA/pF, n = 10) was observed at about 0.8 mM ATP. ATP-dependent HEK293 cell currents were almost completely blocked by suramin (30 µM), the P2 purinergic antagonist (0.17 ± 0.13 pA/pF, n = 10, p < 0.0001), and they were negligible in the HEK293 cells expressing GFP only (0.28 ± 0.07 pA/pF, n = 11). The ATP-biosensor cells successfully detected ATP release from single atrial myocyte under shear stress at millisecond intervals. This ATP detection method may be used to directly quantify real-time ATP release, which may provide improved spatial and temporal information on cellular ATP release.
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2002-01-01 | 평가 | 등재후보학술지 유지 (등재후보1차) | KCI후보 |
1999-07-01 | 평가 | 등재후보학술지 선정 (신규평가) | KCI후보 |
기준연도 | WOS-KCI 통합IF(2년) | KCIF(2년) | KCIF(3년) |
---|---|---|---|
2016 | 0.2 | 0.2 | 0.22 |
KCIF(4년) | KCIF(5년) | 중심성지수(3년) | 즉시성지수 |
0.23 | 0.18 | 0.403 | 0.02 |
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