톡소포자충 배양시 약제투여에 따른 Toxoplasma P30 유전자의 발현 = Drug Effects on P30 Gene Expression of Toxoplasma gondii in Culture Cell
To know the drugs effect on gene expression and its regulating mechanism by RT-PCR and southern blot hybridization assay based on detection of the P30 gene encoding the major surface antigen, P30 of Toxoplasma gondii and the DNA synthesis in T. gondii infected HeLa cells.
The experiment was performed and the results were as follows.
1. The thymidine incooperation in DNA of HeLa cell and T. gondii infected HeLa cell reached peak level at 36 hours and suddenly decreased at 48 hours. The uracil incooperation in DNA of T. gondii reached peak level at 48 hours.
2. The decrease of P30 gene expression began from 24 hours after pyrimethamine treated and 36 hours after methotrexate treated in T. gondii.
The results were some what different. Pyrimethamine was more sensitive and acted earlier to T. gondii than Methotrexate did. The decrease of P30 gene expression of T. gondii was regulated these drugs in dose dependent manner.
3. The effects of dibutyryl cyclic AMP on P30 gene expression increased peak at 24 hours and on contrary decreased at 60 hours after treatment in dose dependent manner, but at 10mM high concentration of dibutyryl cAMP, P30 gene expression was supressed.
4. Actinomycine D supressed the P30 gene expression of T. gondii in HeLa cell.
As the results, we presume pyrimethamine acts more powerful and earlier to supresses P30 gene expression than methotrexate, and it is regulated at transcription level. The results of RT-PCR were in agreement with that of southern blot hybridization.
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