SCOPUS
KCI등재
Aspergillus coreanus NR 15-1과 Aspergillus oryzae NR 2-5의 원형질체 형성의 최적조건 = Optimal Conditions of Protoplast Formation of Aspergillus coreanus NR 15-1 and Aspergillus oryzae NR 2-5
저자
발행기관
학술지명
한국미생물·생명공학회지 (Korean Journal of Microbiology and Biotechnology)
권호사항
발행연도
2001
작성언어
Korean
주제어
KDC
570.6
등재정보
SCOPUS,KCI등재
자료형태
학술저널
발행기관 URL
수록면
12-17(6쪽)
제공처
소장기관
한국 전통누룩으로부터 분리·동정된 Aspergillus coreanus NR 15-1로부터 glucoamylase활성이 높은 X11(Arginine^-) 변이주와 A. oryzae NR 2-5로부터 α-amylase활성이 높은 Z6 (Adenine^-) 변이주의 원형질체융합을 위한 원형질체 형성의 최적조건을 검토했다.
원형질체 형성을 위한 세포벽 분해효소는 X11 변이주와 Z6 변이주 모두 cellulase와 driselase를 복합적으로 각각 10mg/ml되게 사용하였을 때 원형질체 형성율이 가장 높았다. 삼투압 안정체는 X11 변이주에서는 0.4 M NaCl이, Z6 변이주에서는 0.6 M NaCl이 가장 효율적이었다 원형질체 형성을 위한 반응 최적 pH는 X11 변이주와 Z6 변이주 모두 pH 5.0에서 가장 높은 원형질체 형성율을 나타내었으며 pH 6.0에서는 형성율이 반 이하로 감소하였다. 반응 최적온도는 두 변이주 모두 30℃가 가장 적합하였으며 그 이상의 온도에서는 원형질체 형성율이 감소하였다. 원형질체 형성을 위한 세포벽 분해효소의 반응 최적시간은 X11 변이주에서는 반응 5시간에, Z6 변이주에서는 반응 6시간이 원형질체 형성율이 가장 높았다. 원형질체의 재생율에 있어서는 두 변이주 모두 반응 4시간 때 X11 변이주가 11.3%로, Z6 변이주는 11.6%로 가장 높았으며 재생되는 원형질체의 수도 가장 많아 반응 시간은 4시간이 적당한 것으로 나타났다.
이상의 조건에서 형성된 원형질체의 평균 크기는 X11 변이주가 3~6㎛ 이며, Z6 변이주는 4~9㎛ 로 다양한 크기의 원형질체가 형성되었으며 원형질체 형성율은 각각 6.54 × 10 exp (7) protoplasts/ml와 3.04 × 10 exp (7) protoplasts/ml이었다.
Aspergillus coreanus NR 15-1 and Aspergillus oryzae NR 2-5 from traditional Korean Nuruk were selected as parental strains producing starch hydrolysis enzymes. X11(Arginine^-) mutant from A. coreanus NR 15-1 showed high glucoamylase activity and total acid productivity. Z6(Adenine^-) mutant from A. oryzae NR 2-5 showed the highest α-amylase activity. Therefore, both X11 and Z6 mutants were selected and investigated for the optimal conditions of protoplast formation for protoplast fusion. Mixture of equal amount of cellulase and driselase(10 mg/ml each) was the most effective as lytic enzymes. The optimal pH and temperature for protoplast formation were 5.0 and 30℃, respectively. The most effective reaction for protoplast formation time was 4 hours. The maximum of protoplast formation of X11 mutant and Z6 mutant were 6.54 × 10 exp (7) protoplasts/ml and 3.04 × 10 exp (7) protoplast/ml, and the regeneration frequencies of the protoplasts were 11.3% and 11.6%, respectively. The size of the protoplasts from X11 and Z6 mutants were 3~6 ㎛ and 4~9 ㎛, respectively.
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