KCI등재
Polymerase Chain Reaction을 이용한 Mycoplasma synoviae의 진단법 확립 = Establishment of a Diagnostic Method for Mycoplasma synoviae using Polymerase Chain Reaction
저자
이영주 (국립수의과학검역원)
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
2003
작성언어
Korean
주제어
KDC
528
등재정보
KCI등재
자료형태
학술저널
수록면
1-5(5쪽)
제공처
Mycoplasma synoviae만을 특이적으로 동정하기 위한 PCR법을 확립하기 위하여 민감성 및 특이성을 조사한 결과, 아래와 같은 결과를 얻었다.
1 표준균주인 M. synoviae, M. gallisepticum, M. iowae, M. iners, M. pullorum, M. anatis, M. gallinaceum 및 M. glycophilum에 대하여 PCR법을 실시한 결과, M. synoviae에서만 207 bp의 특이적인 증폭산물이 관찰되었을 뿐, 기타 Mycoplasma spp.에 대해서는어떠한 증폭산물도 나타나지 않아 작성된 primer의 특이성이 확인되었다.
2. 국내 발병계의 관절로부터 분리된 M. synoviae 8주에 대하여 PCR법을 적용한 결과, 8주 모두에서207 bp의 특이 band가 관찰되어 신속한 원인체의 동정이 가능한 것으로 나타났다.
3. PCR법의 민감성을 조사하기 위하여 M. synoviae의 genomic DNA양을 1㎍/㎍l에서 10진희석후 PCR법을 실시한 결과, 100 1㎍/㎍l의 DNA농도까지 검출이 가능하였다.
4. PCR법에 의한 증폭산물이M. synoviae의 특이 유전자임을 확인하기위하여 제한효소 WvalI, HphI, NcoI 및 RsaI을 처리한 결과, GenBank의 예상절편부위와 일치하여 정확한 부위에서 증폭이 이루어졌음을 확인할 수 있었다.
Mycoplasim synoviae (M. synoviae) causes synovitis and respiratory disease in chickens and turkey. The diagnosis of M. synoviae is currently based on microbiological and serological tests. However, the methods have some problems such as time-consuming, laborious, and cross-reaction. Therefore, a new method has been required for the diagnosis.
To establish a sensitive and specific diagnostic method for detection of M. synoviae, synthetic oligonucleotide primers based on the nucleotide sequence of 16s rDNA were synthesized and a polymerase chain reaction (PCR) was established with the primers. The 207 bp DNA fiagments by PCR were only amplified in reference strain and 8 field isolates of M synoviae. However, no PCR product was detected fiom other Mycoplasim spp. Sensitivity of the PCR was up to 100 pg genomic DNA. The identity of the PCR products was confirmed by comparison of patterns of restriction endonuclease analysis with AvaI, HphI, NcoI and RsaI
This result suggested that the PCR technique was a valuable diagnosis for M synoviae.
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