Anti-oxidant, anti-inflammatory, and anti-cancer activities of cynaroside and n-butanol fraction of Orostachys japonicus in PANC-1 human pancreatic cancer cells = 시나로사이드와 와송의 부탄올 분획물의 항산화, 항염증 및 인체 췌장암 세포에 대한 항암 활성
저자
발행사항
김해 : 인제대학교일반대학원, 2023
학위논문사항
학위논문(박사)-- 인제대학교일반대학원 : 식의약생명공학과 임상병리학과 2023. 2
발행연도
2023
작성언어
영어
주제어
발행국(도시)
경상남도
형태사항
; 26 cm
일반주기명
지도교수: 이동석
UCI식별코드
I804:48012-200000663047
소장기관
플라보노이드는 페놀 화합물로 많은 만성 질환들을 치료하고 예방할수 있다는 잠재적인 이점으로 인하여 많은 관심을 받고 있다. 본 연구에서는 부탄올 추출물과 그 추출물의 성분 중 하나인 시나로사이드로부터 다양한 생리활성을 연구하고 항산화, 항염증 그리고 항암활성 효능을 연구하고자 하였다. 시나로사이드는 강력한 항산화 활성을 갖는 것으로 잘 알려져 있는 플라보노이드이다. 그러나 시나로사이드의 항염 및 항암 활성에 대한 통합연구는 많이 이루어져 있지 않다. 이 연구는 시나로사이드와 와송의 부탄올 분획물의 항산화와 항염 및 췌장암에 대한 항암활성을 입증하였다. HPLC 분석은 와송 부탄올 분획물에 세가지 다른 유형의 플라보노이드 배당체를 함유하고 있음을 증명하였다. 그중 시나로사이드가 가장 많은 농도를 포함하고 있다. 시나로사이드와 와송 부탄올 분획물의 자유기 소거 효과를 확인하기 위해 DPPH 분석과 RAW 264.7내에서 HO-1 발현 양을 통한 항산화 효과를 확인했다. 부탄올 분획물과 시나로사이드의 항염증 효과를 증명하기 위해 RAW264,7 세포 내에서 지질다당류(LPS)로 자극된 산화질소(NO) 억제를 확인하였다. 또한 NO와 같은 염증성 사이토카인인 PGE2 또한 웨스턴 블럿을 이용하여 항염증 효과를 보았다. 와송의 부탄올 분회물과 시나로사이드의 항암활성은 MTS assay의 실험하였고, DAPI 염색을 통해 세포 사멸이 관찰되었다. 세포주기는 유세포 분석기를 사용하여 조사되었다. 웨스턴 블롯을 이용하여 단백질 발현정도를 확인한 결과, caspase-3, -8, -9를 효과적으로 활성화하고 CDK2와 CDK4를 억제했다. 이를 통해, 시나로사이드와 와송 부탄올 분획물은 췌장암 세포에서 뛰어난 항암 효과를 보이고 있다. 이번 연구를 토대로 우리는 시나로사이드를 주요 플라보노이드 화합물로 함유하는 와송 부탄올 분획물이 향후 강력한 항산화, 항염, 항암제롤 활용될 수 있을 것이라 기대한다.
더보기Flavonoids are known as bioactive phenolic compounds that have been of interest, owing to their potential benefits for curing and preventing many chronic diseases. Cynaroside (luteolin-7-o-glucoside) is a flavonoid that has been reported to possess strong anti-oxidant activity. However, the integrative study for anti-inflammatory and anti-cancer activities of cynaroside is rare. This study demonstrated anti-oxidant, anti-inflammatory, and anti-pancreatic cancer activities of cynaroside and n-butanol fraction from Orostachys japonicus (OJB). HPLC analysis indicated that OJB contained three different types of flavonoid glycosides; the highest concentration among them was cynaroside. The anti-oxidant activities of cynaroside and OJB were tested using 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) assay, and HO-1 protein level. Anti-inflammatory effect was observed by inhibition of lipopolysaccharide (LPS)-stimulated nitric oxide (NO) in RAW 264.7 cells in a dose-dependent manner. Additionally, the anti-proliferative activity of them in PANC-1 cell was evaluated by 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-5-[3-carboxymethoxyphenyl]-2-[4-sulfophenyl]-2H-tetrazolium (MTS) assay. Apoptosis was observed by DAPI staining. The cell cycle was examined using flow cytometry. Western blot was used to analyze protein levels. OJB effectively activated caspase-9, -8,-3 and inhibited CDK2 and CDK4. As a result, both cynaroside and OJB exerted anti-cancer effects on PANC-1 cells. OJB induced cell death for 24 h in PANC-1 cells. In conclusion, OJB containing cynaroside as a major flavonoid compound has the potential to be utilized as a potent anti-oxidant, anti-inflammatory, and anti-cancer agent in the future.
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