FOLLOW-UP OF EXOGENOUS DNA BY LIPOFECTIN-AIDED SPERM-MEDIATED GENE TRANSFER
저자
발행사항
Seoul : Graduate School of Agriculture and Animal Science Kon-Kuk University, 1996
학위논문사항
Thesis(M.A.)-- Graduate School of Agriculture and Animal Science Kon-Kuk University: Department of Biotechnology 1996. 8
발행연도
1996
작성언어
영어
주제어
KDC
527.34 판사항(4)
발행국(도시)
대한민국
형태사항
iii, 26p. : ill.,plates ; 27cm .
일반주기명
References: p. 23-26
소장기관
형질전환 가축을 생산하기 위한 고전적인 접근방법은 노동집약적이고 시간이 많이 소요되며 또한 비효율적이고 비용도 많이 소요된다. 따라서, 본 연구에서는 성숙정자에 외래유전자를 도입하여 난자와 수정시킴 으로서 손쉬운 방법에 의하여 형질전환동물을 생산하기 위한 새로운 방법을 개발하려고 시도하였다. 외래유전자는 유전자를 핵내로 운반할 수 있는 liposome과 복합체를 형성시킴으로서 BSA의 첨가 유무에 따라서 또는 DNA만을 가지고 정자내부로 외래 유전자를 도입한 결과 정자세포내로의 외래유전자 전이는 각각 68, 41과 13%를 보였다. DNA단독 과 BSA의 존재 유무에 따라 liposome을 가지고 변성한 정자에 의하여 수정된 수정란에 각각 4/58 (6.8%), 16/79 (20.2%)와 36/80 (45%)가 외래유전자를 전달하였다. 이들 유전자의 전달이 정자세포에서의 안정된 삽입에 의하여 전달되었는지 또는 일시적인 전달인지를 배반포 단계에서 PCR에 의하여 조사한 결과, 조사된 모든 군에서 단순한 결합에 의하여 전달된 것으로 확인되었다. 이들 유전자의 전달부위를 in situ hybridization에 의하여 조사한 결과, 대부분의 외래 유전자는 투명대 또는 perivitelline의 주위에 (22/30) 위치하였으며, 드물게 수정란의 체 세포에 위치한 것으로 확인되었다. 그러나, 도입유전자는 목적으로 하는 전핵에 위치하기 보다는 단순히 투명대, 난황막 또는 극히 일부만이 체세포에 위치함으로서 외인성유전자의 전달은 성숙정자의 단순한 결합에 의하여 전달되었다는 사실을 시사했다. 또한, 비록 외래유전자의 일과성의 발현이 수정란에서 확인되었지만, 그 비율은 매우 낮았다. 따라서 이러한 결과는 성숙정자세포는 비록 외래유전자를 수정을 통하여 전달가능하나, 도입된 외래 유전자는 수정란의 발달과 함께 분해됨으로서 형질전환 동물의 생산을 위해 이용불가능함을 제안했다.
더보기Sperm vector system is thought to have a potential performance for the production of transgenic livestock. The present studies were undertaken to investigate the binding sites and uptake of foreign DNA in sperm nucleus and to examine ability of transportation of exogenous DNA into oocytes by PCR, in situ hybridization and flow cytometry. Transfection rate of sperm cells by treatment with DNA/lipofectin complexes in the presence and in the absence of BSA, and with DNA alone was 68, 41 and 13%, respectively. In the zygotes, transferring rates of exogenous DNA by sperms transfected with DNA alone, lipofectin/DNA complexes in the presence and absence of BSA was 4/58 (6.8%), 16/79 (20.2%), 36/80 (45%), respectively. In the blastocyst stages, however, no multicopies rates, which indicating integration of exogenous DNA into host genome, were not detected by any methods. By in situ hybridization analysis, the transferred DNA in most oocytes was located in zona pellucida and perivitelline (22/30) and rarely located cytoplasm (8/30), while exogenous DNA in pronucleus and nucleus as not detected. Even though expression of bacterial LacZ gene was detected, the rates were very low. These results suggest that sperm cells can carry foreign DNA into eggs by fertilization, but that foreign DNA is degraded in developing embryos without stable integration into zygote genome.
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