입자 면역반응 분석법을 이용한 축산 사료의 Salmonella와 E.coli 검출을 위한 기초 연구 = A Preliminary Study for Detection of Salmonella and E.coli in Livestock Feed by Particle Immunoarray
저자
박하은 ( Haeun Park ) ; 신원진 ( Wonjin Shin ) ; 정지연 ( Jieyun Jung ) ; 박두산 ( Tusan Park )
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
2017
작성언어
Korean
주제어
자료형태
학술저널
수록면
205-205(1쪽)
제공처
국내 송아지에 다발하는 세균성 소화기계 질병들 중 대장균성 설사가 소의 번식 및 단기 비육하는 대부분의 농장에서 문제시 되고 있다. 심한 경우 신생 송아지의 90~100%가 설사증을 보이기도 하고 이들중 20~30%가 폐사하는 경우가 나타나고 있다. 이처럼 설사증을 유발하는 E.coli와 Salmonella는 송아지의 생명에 심각한 위협을 가한다. 그러므로 균 감염에 따른 폐사를 예방하기 위해서는 E.coli와 Salmonella가 송아지 축사에 유입되는 경로를 차단하는 것이 중요하다. 그 일환으로 사료 안의 해당균을 검출하는 시스템을 보편화 할 필요가 있다.
본 연구에서는 입자면역법(Particle Immunoarray)을 통해 균의 농도에 따라 항체 결합 정도를 광학적으로 분석하였다. 입자(Polystyrene Latex)에 각각 E.coli와 Salmonella의 항체를 붙인 후, 이 결합물에 각 항원이 포함되어 있는 시료를 농도 별(10, 10<sup>2</sup>, 10<sup>3</sup> … 10<sup>7</sup> CFU/mL)로 넣어 항원-항체 반응을 일으킴으로써 결합물과 균들을 응집시킨다. 결합물과 균들이 응집되어 있는 정도에 따라 산란광이 다르게 나타나는데, 이를 통해 시료에 포함되어 있던 균의 농도를 측정하는 방법을 사용하였다. 현미경을 통해 항원 시료의 농도 별로 입자가 뭉치는 정도를 시각적으로 관찰하고, 산란광 측정 플랫폼을 통해 입자의 뭉침 정도에 따른 산란광의 차이를 측정하였다. 이를 통해 응집하는 입자의 크기를 광학적으로 검출하는 바이오 센서를 개발하고 또한 사료 안전성 측정에 활용하기 위한 기초연구자료가 되길 기대한다.
더불어 위해 균으로 오염된 사료로부터 이들 균을 추출하는 과정에서 균 추출률을 측정하였다. 균이 사료에 들러붙어 모든 균을 추출하는 것이 어렵기 때문에 그 추출률을 확인해 둘 필요가 있었다. TMR(Total Mixed Ration)사료에 E.coli와 Salmonella를 각각 농도 별(10<sup>3</sup>, 10<sup>4</sup>, 10<sup>5</sup> CFU/mL)로 접종 한 후, 균이 자리 잡을 수 있도록 1시간 동안 상온에서 배양한다. 균이 접종된 사료와 phosphate buffered saline (PBS, pH 7.2)를 1:9의 부피비로 10분 간 혼합한다. 혼합물에서 추출한 균을 배양하여, 초기 균 농도와 사료에서 추출한 균의 농도를 비교하여 추출 과정에서의 균 추출률을 확인하였다. 그 결과 10<sup>3</sup> CFU/mL까지는 추출률이 높았지만 10<sup>4</sup> CFU/mL 이상부터는 낮은 추출률을 보였다.
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