lacZ 유전자를 이용한 Bacillus subtilis 유전체에서의 promoter 부위 탐색 = Screening of promoter regions from Bacillus subtj]is genomic DNA by lacZ gene
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학술지명
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발행연도
2007
작성언어
Korean
KDC
405
자료형태
학술저널
수록면
5-19(15쪽)
제공처
Bacillus subtilis는 GRAS균주로서 최근에 유전공학 식품과 약품 재료로 많이 이용된다. 본 연구에서는 B. subtilis에서의 expression system을 만들기 위해 B. subtilis의 genomic DNA에서 promoter 서열을 검색하였다. lacZ 유전자를 가지는 상업용 TA cloning vector에서 이 promoter를 제거하고 B. subtilis의 DNA 단편으로 이 부위를 대체했다. 재조합 plasmid library를 DH5a에 형질전환 시켰다. 형질전환 후 X-gal 분석을 통하여 blue colony를 골라내어 삽입된 단편의 서열을 분석하였다. Plasmid 서열분석을 통해 promoter로 추정되는 4개의 서열을 얻었다. IPTG test를 통해 이 서열들의 유도성 여부를 확인했다. On-line software program인 BPROM(http://www.softberrt.com)을 이용하여 추정된 4개의 서열들이 promoter 특이 보존성 서열을 가지고 있음을 확인했다. 이러한 서열들은 B. subtilis의 promoter로서 가능성을 가짐에 따라, 향후 유전자 발현 실험을 통해 promoter 활성을 검증 하는 등의 연구가 수행되어야 할 것이다.
더보기Bacillus subtilis is one of the GRAS bacteria, and it's application for production of genetic engineered food and drug material is increasing in recent days. In this study, for the construction of expression system in B. subtilis, we screened promoter sequences in the bacterial genomic DNA. Using the commercial TA cloning vector containing lacZ gene, we removed its promoter and replaced it with Bacillus DNA fragments. This recombinant plasmid library was transferred to DH5a strain. Based on the X-gal assay after the transformation, blue colonies were selected and their plasmids were sequenced in the replaced region. 4 sequences were recruited as candidate promoters. We confirmed the induction of these sequences by IPTG test. On-line software program, BPROM, was showed all of these sequences have promoter-specific conserved sequences. We suggest these sequences are probable promoter of B. subtilis, and it should be further studied for applicational development.
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