DgLsL anti-sense partial 유전자 도입에 의한 국화 ‘Zinba’ 품종의 조기개화 개체 선발
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2008
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Korean
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64-69(6쪽)
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DgLsL anti-sense partial 유전자를 국화 ‘Zinba’에 형질전환하였다. DgLsL anti-sense partial 유전자는 pCAMBIA2300을 포함하는 Agrobacterium C58C1을 통하여 도입하였다. Agrobacterium C58C1을 접종한 후 엽절편을 10㎎/L kanamycin이 함유된 재분화 배지(MS + 1.0㎎?L<SUP>-1</SUP> BA + 0.5㎎?L<SUP>-1</SUP> IAA)에서 1차 선발을 하였고, 재분화 배지에 20㎎?L<SUP>-1</SUP> kanamycin이 첨가된 배지에서 2차 선발을 하였으며, 20㎎?L<SUP>-1</SUP> kanamycin이 첨가된 MS 배지에서 3차 발근선발을 하였다. 3차 발근선발까지 220개의 신초(3.6%)가 생존하여 발근하였다. Npt Ⅱ primer로 PCR을 한 결과 그 중 101개의 신초(1.6%)가 putative transformant로 확인되었고, Southern 분석을 한 결과, 86개체(1.5%)가 npt Ⅱ 유전자와 DgLsL anti-sense partial 유전자가 도입된 형질전환체로 확인되었다. DgLsL anti-sense partial 유전자의 형질전환율은 1.5%로 매우 양호하였다. DgLsL partial anti-sense 유전자가 도입된 형질전환체를 순화하여 7월 19일에 온실에 정식하여 자연상태에서 측지발생 및 개화 등을 조사하였다. 그러나 DgLsL anti-sense partial 유전자가 도입된 모든 형질전환체에서 측지가 발생하였으며, 형질전환체 LS2, LS9, LS10 3계통은 비형질전환체(대조구)보다는 조기개화하는 특성을 보였다.
더보기The DgLsL anti-sense partial gene (526 bp) was introduced into chrysanthemum (Dendranthema grandiflorum Kitamura) ‘Zinba’ by co-cultivation with Agrobacterium tumefaciens strain C58C1 (pCAMBIA2300). After infection of leaf segments with A. tumafaciens, infected explants were cultured on a regeneration medium ((RM: MS basal salts + 1.0 ㎎?L<SUP>-1</SUP> BA + 0.5 ㎎?L<SUP>-1</SUP> IAA + 10 ㎎?L<SUP>-1</SUP> kanamycin, pH 5.8) with 0.7% plant agar (Duchefa, The Netherlands)) as the first selection medium, and then were transferred to the second selection medium containing 20 ㎎?L<SUP>-1</SUP> kanamycin. After a selection process in the selection RM, putatively-transformed explants were placed on a rooting medium (MS basal salts + 20 ㎎?L<SUP>-1</SUP> kanamycin) as the third selection. Until the third selection, 220 plantlets (3.6%) of total inoculated explants (6,740 explants) survived and rooted. Also, 101 plantlets (1.6%) among them were confirmed as putative transformants with the nptII gene by PCR analysis. Using Southern blot analysis, 86 (1.5%) out of 101 plantlets were confirmed as transformants with the nptII gene and the DgLsL anti-sense partial gene. The transformation efficiency of DgLsL anti-sense partial gene was 1.5%. All transformants with DgLsL anti-sense partial gene and non-transformants were acclimatized and established well in a greenhouse. Lateral branches were observed in both transformants and non-gene transformed chrysanthemums. However, three transformed lines (LS2, LS9, and LS10) with a DgLsL partial anti-sense gene showed early flowering.
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