SCOPUS
KCI등재
홍조류인 한국산 김종에서의 염색체 DNA 분리방법
저자
최학선(Hack-Sun Choi) ; 최경희(Kyong-Hee Choi) ; 이춘환(Choon-Hwan Lee) ; 류태형(Tae-Hyoung Rhew)
발행기관
학술지명
한국식품영양과학회지(Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition)
권호사항
발행연도
1999
작성언어
Korean
등재정보
SCOPUS,KCI등재
자료형태
학술저널
발행기관 URL
수록면
1166-1172(7쪽)
제공처
소장기관
순수한 핵산 분리가 어려운 김종에서 염색체를 정제하는 효과적이고 시간이 적게 소요되는 방법을 개발하였다. Isopropanol 농도를 조절하고 각 step의 protocol을 새로 작성한 결과 정제된 핵산의 총 당오염도가 유의성있게 줄었고(탄수화물 1.0㎎/1g 건조중량(7) vs. 0.108㎎/1g), 단백질 오염도도 개선되었으며(A_(260)/A_(280): 1.89), polyphenol화합물 오염도도 크게 개선(A_(260)/A_(230): 160)할 수 있었다. 또 이 방법으로 정제한 DNA를 사용했을 때, 일반적으로 분자분류에 사용하는 small nuclear DNA를 증폭하기 위해 기존의 상동성있는 primer를 사용하여 PCR 증폭한 결과 약 500bp의 intron을 갖는 (18) 2.3kb정도의 PCR product를 얻었다. 김에서 핵산을 정제할 때에는 불순물 오염정도(다당류오염, polyphenol화합물 오염, 이차 대사산물 오염 등)가 김엽체부위, 성장시기 등에 따라서 상이하므로 건조된 엽체중 장기간(1년 이상) 보관된 엽체를 무작위적으로 섞어서 시료로 사용하면서 이 DNA정제방법이 모든 김종류에 유용하게 쓰여질 수 있는지 확인하기 위해서 다양한 종류의 김으로부터 DNA를 정제해 보았을 때 특히 가장 불순물 오염도가 크고, 핵산정제가 어려운 긴잎돌김, 모뮈늬돌김에서도 시험한 결과 순수한 DNA를 정제할 수 있었다(Fig. 6).
더보기A method for the isolation and purification of DNA from a red algae, Porphyra was innovated. The innovation of the method consists mainly of three steps that include sodium acetate treatment, chloroform extraction, and 0.2 volume isopropanol precipitation step. The sodium acetate treatment was designed to remove polysaccharide contamination, and the isopropanol step to remove proteins and salts contaminents. Genomic DNA's of several species(for example, P. tenera, P. yezoensis, P. seriata, and P. pseudolinearis) was successfully isolated by the innovated method. The amount of DNA purified from one g of sample material with the innovated method was 53㎍ in average. The resulting DNA was characterized to include high molecular weight and showed no nuclease activity. The DNA was pure enough to be digested directly by various restriction enzymes without any difficulties. Porphyra DNA was pure enough and adequate for amplification reaction through the polymerase chain reaction (small nuclear rDNA PCR amplification).
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