대장균의 형질전환을 위한 Electroporation 最適條件 = Optimization for electroporation of Escherichia coli
저자
발행기관
公州大學校 基礎科學硏究所(Research Institute for Basic Science Kongju National University)
학술지명
권호사항
발행연도
1995
작성언어
Korean
KDC
472.000
자료형태
학술저널
수록면
45-52(8쪽)
제공처
소장기관
형질전환을 위한 기존의 electroporator들이 일회용 cell과 고전압을 사용하지만, 한국생공에서 만들어진 Jetgene electroporator는 영구용 cell과 저전압을 사용하여 형질전환할 수 있도록 한 한국실정에 맞는 새로운 기기이다. 이 기기를 사용하여 대장균의 형질전환을 위한 electroporation 최적조건을 찾기 위하여 전기장의 세기, 펄스의 길이, plasmid DNA의 크기, 균주, DNA 농도, 세포의 농도, 세척 용액과 횟수, 배지의 종류가 Electroporation의 효율에 영향을 미치는 영향을 조사했다. 전기장의 세기는 12.14 - 12.85 kV/cm에서, 시정수 (τ)가 4-5 msec에서, 조사한 대장균주 중에서 BW 13745에서 최고의 효율을 나타냈다. DNA 양에 형질전환 효율이 비례적으로 증가하지는 않았지만 DNA 양이 많아질수록 많은 형질전환체가 얻어져 DNA 1-2㎍에서 109의 형질전환체가 얻어졌다. 수확시 세포의 밀도가 OD600이 0.6-0.8일 때 최고의 효율을 나타냈다 여러 세척액 중에서 10 % glycerol로 세척했을때, 2회 세척했을 때, 여러 배지 가운데 SOC에서 자란 균을 사용했을 때 최고의 효율을 나타냈다. 이 조건들을 조합해 실험을 해본 결과 DNA 1㎍당 1점에서 1010까지의 형질전환체를 얻을 수 있었다. 다른 electroporator에 비하면 상당히 저가인 한국생공의 Jetgene electroporator를 사용하여 적은 비용으로 높은 효율의 형질전환을 할 수 있었다.
더보기Although disposable cells and high voltage are used for electroporators, a new electroporator for which permanent cells and low voltage can be used was manufactured from Korea Biotech. Inc We wanted optimize the procedures for electroporation using this electroporator. The effect of electric field strength, pulse length, sizes of plasmid, host strains, washing solutions and times, growth media were studied. Maximum transformation efficiency for E. coli strain CC118 was obtained at electric field strength of 12.14-12.85 kv/cm and retention time of 4-5 msec. Although the number of transformants was not proportional to the amount of plasmid DNA, larger amount of DNA gave higher number of transformants. 109 transformants were obtained with 1-2㎍ DNA. The highest number of transformants were obtained using cells harvested at OD600 0.6-0.8. 10% glycerol out of washing solutions, 2 times washing, SOC medium out of growth media were best for high efficiency of transformation. 109-1010 transformants were routinely obtained. Jetgene electroporator seems adequate for electroporation at lower price and working cost.
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