Purification of Human Interferon-${\beta}$ from Recombinant E. coli = 유전자 재조합 대장균으로부터 인간 Interferon-${\beta}$의 정제
저자
이진규 ; 이석재 ; 최문기 ; 정광회 ; 신광순 ; 백승복 ; Lee, Jin-Kyu ; Lee, Seok-Jae ; Choe, Moon-Kee ; Chung, Kwang-Hoe ; Shin, Kwang-Soon ; Paik, Sung-Bok
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
1990
작성언어
English
자료형태
학술저널
수록면
166-171(6쪽)
제공처
소장기관
유전자 재조합 인간 Interferon-${\beta}$를 초음파 처리, 8 M Guanidine-HCl 추출, inclusion body의 용해, 희석, Blue Sepharose CL-6B column chromatography, HPLC gel filtration 방법 등을 이용하여 대장균으로부터 정제하였다. 정제된 IFN-${\beta}$의 specific activity는 $3.1{\times}10^8$ IU/mg이었고 정제도는 1,902이었다. 정제된 IFN-${\beta}$는 환원된 상태와 환원되지 않은 상태에서 SDS polyacrylamide gel electrophoresis 한 결과 모두 단일 띠로 나타났으며 분자량은 18,000 dalton이었다. N-말단 아미노산을 조사한 결과 재조합 인간 IFN-${\beta}$는 천연형 인간IFN-${\beta}$와 같이 N-말단이 methionine임이 밝혀졌다. 전자 현미경을 이용하여 inclusion body 형성을 조사한 결과 IFN-${\beta}$ 유전자를 가지고 있는 대장균에서는 inclusion body의 형성을 확인할 수 있었으나 숙주(wild type)에서는 확인되지 않았다. 최종적으로 정제된 IFN-${\beta}$의 정제도는 HPLC gel filtration 한 결과 99% 이상으로 나타났다.
더보기Recombinant human interferon-${\beta}$ was purified to homogeneity from E. coli by methods of sonication, extraction with 8 M Guanidine HCl, solubilization of inclusion body, dilution, Blue Sepharose CL-6B column chromatography and HPLC gel filtration. Specific activity of purified IFN-${\beta}$ was $3.1{\times}10^8$ IU/mg protein and the purification was 1,902 fold. The purified IFN-${\beta}$ was a single band on SDS polyacrylamide gel electrophoresis under reducing condition and non-reducing condition and its molecular weight was estimated to 18,000 dalton. The results of N-terminal analysis showed that recombinant human IFN-${\beta}$ has N-terminal methionine same as natural human IFN-${\beta}$. The inclusion bodies were observed in the E. coli cells harboring IFN-${\beta}$ gene but not observed in the host cells (MM 294). The purity of finally purified IFN-${\beta}$ was more than 99% by HPLC gel filtration.
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