SCOPUS
SCIE
32 EFFECTS OF FUSION/ACTIVATION METHODS ON DEVELOPMENT OF EMBRYOS PRODUCED BY NUCLEAR TRANSFER OF PORCINE FETAL FIBROBLASTS
저자
Cong, P. Q. ; Song, E. S. ; Kim, E. S. ; Li, Z. H. ; Yi, Y. J. ; Park, C. S.
발행기관
학술지명
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발행연도
2007
작성언어
-등재정보
SCOPUS,SCIE
자료형태
학술저널
수록면
134
제공처
<P> Pigs have become increasingly important in the field of biomedical research, and interest has grown in the use of transgenic cloned pigs as potential xenograft donors. The present study were carried out to investigate the effects of intensity of DC pulse, number of DC pulses, and equilibration before fusion/activation on developmental ability of porcine embryos derived from nuclear transfer. Porcine cumulus-oocyte complexes (COCs) were cultured in modified TCM-199 (mTCM-199) medium for 44 h at 38.5�C, 5% CO2 in air. After in vitro maturation (IVM), metaphase II oocytes were selected for enucleation. Porcine fetal fibroblasts were obtained from a porcine fetus on Day 35 of gestation as donor cells. Oocytes were enucleated by removing, with a micropipette, the first polar body along with adjacent cytoplasm containing the metaphase plate; then a donor cell was injected in contact with the cytoplasm of each oocyte. In experiment 1, several different fusion/activation intensities (two DC pulses of 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, and 2.0 kV cm-1 for 30 �s) were carried out to investigate the effect on the development of nuclear transfer embryos. In experiment 2, the reconstructed oocytes were fused and activated with 1, 2, or 3 DC pulses of 1.2 kV cm-1 for 30 �s. In experiment 3, reconstructed oocytes were equilibrated in mTCM-199 medium at 38.5�C, 5% CO2 for 0, 1, 2, 3, 4, 5, and 6 h. After equilibration, the reconstructed oocytes were fused and activated with one DC pulse of 1.2 kV cm-1 for 30 �s in fusion medium. The reconstructed embryos were transferred into PZM-3 medium containing 0.3% BSA for further culture. The rates of embryo cleavage and development of blastocyst stage were evaluated at 48 h and 6-7 days, respectively. The cell numbers of blastocysts were counted by using Hoechst 33342 epifluorescence staining. Data were analyzed by ANOVA and Duncan </P>
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