인체 간암세포주 (Hep 3B)의 증식에 미치는 amiloride의 억제효과 = The Effect of amiloride on the Growth of Hepatocellular Carcinoma Cells
Background/Objective : Cytoplasmic alkalinization induced by activation of the Na+/H+ antiporter which is stimulated upon the addition of growth-promoting agents, such as insulin, epidermal growth factor, phorbol ester, plays an essential role in the initiation on cell proliferation. In the present study the effects of amiloride, a specific and reversible inhibitor of Na+/H+ exchanger, on the growth of human hepatocellular carcinoma cell line, Hep 3B were examined and the effects of 5-fluorouracil (5-FU) combined with amiloride were also studied to determine the role of amiloride in the treatment of hepatocellular carcinoma. Cell cycle analysis was done to examine the mechanisms for the inhibitory effects of amiloride.
Methods : The growth of Hep 3B cells were examined by counting cell number on two and four days treatment with 1 uM, 10 uM, 20 uM, 40 uM, 80 uM, 160 uM amiloride, and 0.1 ug/ml, 0.3 ug/ml 5-FU, after plating Hep 3B cells into 35-mm2 plastic dishes at a density of 20x10^4 cells/dish. The reversibility of the effects of amiloride was examined on two days to eight days treatment with 20uM amiloride after seeding 4x10^4 cells/dish. Cell cycle analysis was done on the cells after four days treatment with 20 uM amiloride.
Results : Amiloride significantly inhibited the growth of Hep 3B in a dose-dependent fashion (p<0.05). The inhibitory effect of amiloride on the growth of Hep 3B cells was firstly shown at the concentration of 1 uM, which is not so higher than the concentration of 0.1-0.2 uM attainable by administration of usual dose of amiloride (5~10 mg). Forty-eight percent inhibition of growth was found at an amiloride concentration of 20 uM and 92% inhibition of growth was found at an amiloride concentration of 150 uM after 4 days treatment. The removal of amiloride by a media change after 48 hours treatment lead to significantly more growth than amiloride treated group (p<0.05). Amiloride combined with 5-FU significantly inhibited the growth of Hep 3B in a dose-dependent fashion compared to an amiloride or a 5-FU alone (p<0.05), which suggested additive effect of the two drugs. After four days treatment with 20 uM amiloride, the fraction of cells in G0-G1 phase, S phase and G2-M phase was 57.9%, 20.8%, 21.3%, respectively in the amiloride group (20 uM) and 38.9%, 20.8%, 40.3% in the control group, showing much higher G1 fraction in amiloride group compared to control group.
Conclusions : Amiloride significantly inhibited the growth of Hep 3B in a dose-dependent fashion, which may be reversible. The reversibility of growth inhibition suggests that amiloride is not a non-specific cytotoxin for Hep 3B cells. Because the lowest inhibitory concentration of amiloride for the growth of Hep 3B cells in this study was 1 uM, which is not so higher than the concentration of 0.1~0.2 uM attainable by administration of usual dose of amiloride (5~10mg), amiloride or its analogues may be used alone or in conjunction with other modalities of therapy of hepatocellular carcinoma, for example, hepatic arterial chemoembolization or radiofrequency interstitial thermal ablation therapy. Since Hep 3B cell transition through the G1 phase was inhibited by amiloride, the inhibitory effects of amiloride on the growth of Hep 3B may be mediated in part by blocking G1-S transition. Further study is needed to clarify the effects of more potent analogues of amiloride on the growth of human hepatocellular carcinoma.
분석정보
연월일 | 이력구분 | 이력상세 | 등재구분 |
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2027 | 평가예정 | 재인증평가 신청대상 (재인증) | |
2021-01-01 | 평가 | 등재학술지 유지 (재인증) | KCI등재 |
2018-01-01 | 평가 | 등재학술지 선정 (계속평가) | KCI등재 |
2017-01-01 | 평가 | 등재후보학술지 유지 (계속평가) | KCI후보 |
2015-01-01 | 평가 | 등재후보학술지 선정 (신규평가) | KCI후보 |
기준연도 | WOS-KCI 통합IF(2년) | KCIF(2년) | KCIF(3년) |
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2016 | 0.02 | 0.02 | 0.03 |
KCIF(4년) | KCIF(5년) | 중심성지수(3년) | 즉시성지수 |
0.04 | 0.04 | 0.21 | 0 |
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