SCOPUS
KCI등재
호알칼리성 Bacillus sp.가 생산하는 Bacteriolytic Enzyme을 이용한 Bacillus subtilis의 형질전환 = Genetic Transformation of Bacillus subtilis by the Bacteriolytic Enzyme from Alkalophilic Bacillus sp.
호알칼리성 Bacillus sp. YJ-451이 생산하는 bacteriolytic enzyme은 Bacillus subtilis 원형질체 형질전환에 사용되고 있는 세포벽 용해효소 lysozyme과 그 작용기작이 서로 다른 endopeptidase로 peptidoglycan peptide subunit의 L-alanine과 D-glutarnic acid 사이를 절단한다. 이 lytic enzyme을 이용하여 B. subtilis의 원형질체 형질전환에 대한 조건을 검토하였다. 대수기 말기까지 생육시킨 균체에 lytic enzyme을 5×10exp(2) U/㎖ 농도로 37℃ 에서 pH 6.5로 90분간 처리하였을 때 원형질체 형성이 가장 잘 되었다. 원형질체 형성을 위한 완충용액내의 osmotic stabilizer인 sucrose는 0.5 M 농도가 가장 적당하였으며 0.8% agar가 첨가된 pH 7.3의 DM-3 재생배지에서 37℃ 로 재생시켰을 때 재생율이 가장 높았다. 형질전환 빈도는 30%(w/v) PEG 6000으로 2분간 처리하였을 때 최고의 형질전환 빈도를 나타내었다. B. subtilis 형질전환에 사용된 pUB110의 농도에 따른 형질전환율은 직선적으로 비례하는 양상을 보였으며, lytic enzyme을 사용하여 형질전환하였을 경우 lysozyme을 사용한 경우보다 형질전환 빈도는 다소 낮았으나 재생시간은 약 30시간 이상 빠르게 일어나 신속한 형질전환에 유리하였다.
The extracellular bacteriolytic enzyme from alkalophilic Bacillus sp. YJ-451 was endopeptidase which hydrolyzes the peptide bond at the amino group of D-glutamic acid in the peptidoglycan. Protoplast transformation system of B. subtilis by the lytic enzyme that differs, in mechanisms, from lysozyme which was used to transformation of B. subtilis was investigated. High protoplast yield was obtained from cells cultured in PAB at the late logarithmic growth phase. Protoplasts of B. subtilis were obtained at best efficiency by treatment with 5×10exp(2) U/㎖ lytic enzyme in the pH 6.5 of SMMP buffer containing 0.5 M sucrose. Cell wall was regenerated efficiently on DM-3 (pH 7.3) medium containing 0.8% agar. Under the best condition for protoplast formation and regeneration the highest transformation efficiency was achieved with 30% (w/v) PEG (M.W. 6000) treatment for 2 min. The transformation efficiency according to plasmid DNA concentration showed a linear relationship to DNA amounts. The transformation frequency by lytic enzyme was lower than lysozyme, but the regeneration time of the one was more rapid by 30 hr than the other.
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