간흡충 성충의 조직항원 부위와 충체 추출물의 항원성 = Tissue antigenic sites and antigenicity of adult worm extracts of Clonorchis sinensis
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학술지명
권호사항
발행연도
1997
작성언어
Korean
주제어
KDC
510.000
자료형태
학술저널
수록면
491-507(17쪽)
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소장기관
간흡충(Clonorchis sinensis)의 수용성추출물의 항원성과 충체조직의 부위별 조직항원의 황원성을 비교함으로써 수용성항원의 항원성을 주도하는 체조직항원부위를 알아보고자 이 실험을 시도하였다.
간흡충의 수용성항원은 충체 추출물(조항원)을 DEAE-anion exchange chromatography로 부분 정제한 분리하원(D1, D2, D3, D4 및 D5)을 사용하였고, 이들 수용성항원은
SDS-PAGE로 각 항원의 분자량별 단백분획상과 EITB로 단백분획의 항원성을 비교하였다.
조직항원의 항원성은 면역황금 표지법으로 부위별 조직항원을 검사하였다. 미세 조직항원의 면역반응 관찰에는 간흡충 감염 토끼 혈청, D3면역 토끼혈청 및 D5면역 토끼혈청을 사용하였다.
간흡충의 수용성항원과 분리항원들은 공통분획들이 관찰되었고 일부 분획들은 염색상 농도 차이를 보였다. 이들 수용성항원의 단백분획들 대부분이 항체와 결합한 것으로 보아 충체 단백물질 대부분이 항원성이 있음을 알 수 있었다. 모든 항원에서 항체와 강하게 결합된 공통 분획은 27 kDa, 16 kDa및 14 kDa분획이었다.
수용성항원과 감염 흰주혈청을 사용한 ELISA에서 D5항원은 감염초기(감염2주)를 제외한 전 감염기간 중 강력한 반응을 보였고, D1항원은 감염초기(2주)에 강한 항원성을 보였다.
면역황금표지법 상 간흡충의 표피, 장상피, 배설낭 및 난황선과 항혈청들(감염혈청, D3면역혈청및 D5면역혈청)의 반응은 강도의 차이는 있으나 항원이 있는 조직들이었다. 전 조직은 D5면역혈청반응에서 강한 항원성을 보였고 D2및 D3면역혈청에서 약한 반응을 보였다. D5면역혈청을 반응시켰을 때 난황선은 많은 황금입자가 표지되어 항원단백질이 풍부한 조직부위로 보이나 감염혈청과 조직의 면역반응에서는 난황선의 항원성은 강하지 않았다.
면역황금표지법 상 간흡충의 표피, 장상피, 배설낭 및 난황선과 항혈청들(감염혈청, D3면역혈청및 D5면역혈청)의 반응은 강도의 차이는 있으나 항원이 있는 조직들이었다. 전 조직은 D5면역혈청반응에서 강한 항원성을 보였고 D2및 D3면역혈청에서 약한 반응을 보였다. D5면역혈청을 반응시켰을 때 난황선은 많은 황금입자가 표지되어 하원단백질이 풍부한 조직부위로 보이나 감염혈청과 조직의 면역반응에서는 난황선의 항원성은 강하지 않았다.
결론적으로 간흡충의 충체추출 수용성항원은 간흡충충체 항원단백질의 혼합체로 구성되었으나 감염혈청과 면역혈청에서 강한 항체결합을 한 장상피 및 배설낭이 주 항원성 단백질함유조직으로 보이며, 이 중 가장 강한 항원성을 보인 장조직은 수용성항원의 항원성을 주도하는 조직항원부위로 생각한다.
The major antigenic site in the tissue of Clonorchis sinensis were observed and compared with antigenicity of the worm extracted soluble antigens.
The worm extracted crude antigen(CSWA) was separated into five protein
fractions(seperate antigens: D1, D2, D3, D4 and D5) by DEAE anion exchange
chromatography. These antigens were analized with SDS-PAGE(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis) and the EITB(enzyme linked immunotransfer blot). Antigenicity of the crude and separated five antigens were evaluated by ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay) reacted with sera from rat infected with Clonorchis sinensis.
The antigenicity in tissue sites of Clonorchis sinensis was observed with
electronmicroscopy by immunogold labeling method using three anti rabbit sera (the infected serum with Clonorchis sinensis, the D3 and the D5 immune rabbit sera).
The results were as follows:
By EITB, the most protein fractions on SDS-PAGE were binded to infected rat sera, and the strongly binding fractions against in all antigens were molecular weight of 27 kDa, 16 kDa and 14 kDa.
In antigenicity estimated by the OD value of ELISA, the D5 was revealed stronger than those of the others. Statistically, the antigenicity of the D5 was stronger(p<0.001) than that of other separated antigens(p<0.05 ~ p<0.001) from 4 weeks to 20 weeks after infection.
In the ultrastructural tissues, the tegumental syncytium, the intestinal epithelium, the excretory bladder and the vitellaria of Clonorchis sinensis were labeled with different density of the immunogold particles against all three antisera. The immunogold particles of a large numbers were labeled on the intestinal epithelium and the excretory bladder, but in the tegument and the vitellaria were labeled scarecely. Much more numbers of immunogold particles were labeled in D5 immune serum than other antisera, and especially, a large number of immunogold particles were labeled in intestinal epithelium.
Summarizing the above results, although the antigenicity of Clonorchis sinensis was shown in all the tissues(tegument, intestine, excretory bladder and vitellaria), the major antigenic site was to be the intestinal region.
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