항림프구 글로불린의 조혈작용 기전에 대한 연구 = Immunostimulatory effect of Antilymphocyte globulin on Hematopoiesis
저자
조경란 (한양대학교 의과대학 내과학교실) ; 김태엽 (한양대학교 의과대학 내과학교실) ; 강준구 (한양대학교 의과대학 내과학교실) ; 홍택원 (한양대학교 의과대학 내과학교실) ; 백상현 (한양대학교 의과대학 내과학교실) ; 정재면 (한양대학교 의과대학 내과학교실) ; 박준성 (한양대학교 의과대학 내과학교실) ; 김동욱 (한양대학교 의과대학 내과학교실) ; 신성준 (한양대학교 의과대학 내과학교실) ; 최찬범 (한양대학교 의과대학 내과학교실) ; 최정혜 (한양대학교 의과대학 내과학교실) ; 안명주 (한양대학교 의과대학 내과학교실) ; 김인순 (한양대학교 의과대학 내과학교실) ; 최일영 (한양대학교 의과대학 내과학교실) ; 김병국 (서울대학교 의과대학 내과학교실 암연구소) ; 김은실 (서울대학교 의과대학 내과학교실 암연구소) ; 이영열 (한양대학교 의과대학 내과학교실)
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
2002
작성언어
Korean
주제어
KDC
510.000
자료형태
학술저널
수록면
73-81(9쪽)
제공처
배경: 재생불량성빈혈 치료 중 하나인 항림프구 글로블린(ALG)/항흉선세포 글로블린은 조혈세포의 자극에 의한 조혈세포 성장인자의 분비 때문일 것이라는 연구가 최근 보고되고 있어 생체 외에서 ALG의 조혈과정에 미치는 영향을 규명하고자 하였다.
방법: 말초혈액 단핵구는 정상인의 말초혈액을 Ficoll-Hypaque에 의해 분리한 후 단구는 2회 연속 부착법으로, T 림프구는 양적혈구를 이용하여 분리하였고 이 순수도는 flow cytometer에 의해 95% 이상임을 확인하였다. 분리된 각 세포는 conditioned medium으로 처리한 후 thymidine uptake test로 세포 증식을 관찰하였고 조혈세포 생체 외 배양은 methylcellulose를 이용한 반고형 배지법을 사용하였다.
결과: 말초혈액 단핵구에 대해 ALG 농도 50μg/mL사이에서 증식을 관찰할 수 있었으며 최대의 효과를 나타낸 농도는 250μg/mL였다. T 림프구 단독 혹은 T 림프구와 단구에서도 ALG 농도 50μg/mL에서 500μg/mL사이에서 효과를 관찰할 수 있었으며 최대효과를 나탸낸 농도는 250μg/mL였다. 그러나 이들 세포군에서는 말초혈액 단핵구보다는 낮은 cpm 값을나타냈고 T 림프구보다는 T+ 단구의 경우에서 더 높은 값을 보여 주었다. 단구만을 대상으로 실험한 경우에서는 모든 ALG 농도에서 세포 내로의 methyltritiated thymidine의 incoporation을 관찰할 수 없었다. ALG-stimulated T lymphocyte-conditioned medium에서는 생체 외 배양에서 얻어진 colony (CFU-GM)가 154개로서 대조군으로 삼은 PHA-LCM의 경우보다 훨씬 많이 형성되었고 ALG-stimulated monocyte-conditioned midium으로 세포배양을 했을 때는 CFU-GM이 64개로 phytohemagglutinin-stimulated leucocyte-conditioned midium의 79개보다는 적지만 12시간 혹은 3일간 세포없이 ALG만으로 배양한 conditionde midium인 12h ALG-M, 3d ALG-M이나 ALG없이 Isocove's modified Dulbecco's medium과 세포만으로 배양한 경우(ALG-0)보다는 많이 관찰되었다.
결론: 본 연구에서 ALG가 정상인에서 면역 자극효과가 있고 혼합배양에서 더 큰 증식효과가 발견되어 둘 사이에 상승효과가 있음을 발견하였다. 생체 외에서 과립구생성(granulopoiesis)을 조절하는 조혈인자의 생성에는 T림프구와 단구의 복잡한 상호작용에 의해 조절되고 항림프구 글로불린으로 자극받은 단구에서 조혈형성인자의 분비됨을 알 수 있었다. 이로서 재생불량성빈혈 환자에서 항림프구 글로블린으로 치료하기 전 생체 외 검사를 시행함으로서 임상 반응을 관찰하는 데 도움이 되리라 생각된다.
Background/Aims: Several studies revealed that the antilymphocyte globulin(ALG) / antithymocyte globulin had immunostimulatory effect on hematopoiesis. The aim of this study was to evaluate how the ALG act on the hematopoiesis.
Methods: Peripheral blood mononuclear cell (PBMNC) was isolated from normal human blood by Ficoll-Hypaque, monocyte from PBMNC by 2 sequential adherence method and T lymphocyte from sheep RBC. Thier purity was all above 95% by flow cytometer. The clones isolated from each cells were cultured in conditioned midium, observed by thymidine uptake test. The cultures of hematopoietic cells, in vitro were obtained using methylcellulose media.
Results: The clones of PBMNC, T lymphocyte and monocyte all started to proliferate at ALG conc. 50μg/mL with their peak at ALG conc.250μh/mL. The proliferation was achieved at a greater degree in a T lymphocyte and monocyte mixture than when done separately in ALG conc.250μg/mL. The clones from ALG-stimulated T lymphocyte- conditioned medium or ALG-stimulated monocyte-conditioned medium proliferated more than in a medium without these stimulatory cells.
Conclusion: We found that ALG had immunostimulatory effect on hematopoiesis, with its effect potentiated by interaction with T lymphocyte and monocyte, which could be controlled, in vitro.
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