중합효소연쇄 반응법에 의한 인형거대세포바이러스(human cytomegalovirus)의 신속한 검출 = Rapid Detection of Human Cytomegalovirus by Polymerase Chain Reaction
목 적 : 인형거대세포바이러스(HCMV)는 면역 저하 환자에서 폐렴, 망막염, 간염 등 치명적인 감염증의 원인이다. 전통적인 세포 배양법으로 HCMV를 분리하기까지는 1주에서 4주가 걸리므로 이 바이러스에 의한 질환이 의심되는 경우 신속한 진단법을 이용한 진단이 바람직하다. 저자들은 한국에서 분리되는 야생주 HCMV를 검출하는데 중합효소 연쇄 반응법을 이용할 경우의 진단적 유용성을 알기 위하여, 전통적인 세포배양법으로 HCMV가 분리된 검체를 이용하여 중합효소 연쇄 반응법의 특이도와 민감도를 평가하였다.
방 법 : 국내 야생주 HCMV 15주, 그리고 전통적인 바이러스 배양법으로 HCMV가 분리된 소변 15검체를 대상으로 중합효소 연쇄 반응을 실시하였다. 중합효소 연쇄 반응은 Towne주의 immediate early antigen의 유전자에서 유리된 primer MIE와 AD169주의 immediate early antigen의 유전자에서 유리된 primer IE를 이용하였다. 증폭 산물은 겔 전기영동 후 EtBR으로 염색하여 자외선 하에서 관찰하였다. Primer IE에 의한 증폭산물은 또한, DNA blot hybridization 방법으로 확인하였다.
결 과 :
1) 국내 HCMV 야생주 15주를 대상으로 중합효소 연쇄 반응을 한 결과 primer IE를 이용한 경우에는 100%(15/15)에서 177bp의 증폭 산물이 관찰되었고, 이들 증폭 산물은 모두 probe IE와 보합 결합되었다. primer MIE를 이용한 경우에는 93%(14/15)에서 435bp의 증폭 산물이 관찰되었다.
2) 세포 배양법으로 HCMV가 분리된 소변 15검체를 대상으로 primer IE를 이용하여 중합효소 연쇄 반응을 한 결과 direct gel analysis 법으로는 73%(11/15)에서, 보합 결합법으로는 87%(13/15)에서 관찰되었다. Primer MIE를 이용한 경우에는 direct gel analysis법으로 87%(13/15)에서 435bp의 증폭 산물이 검출되었다.
결 론 : Primer IE와 MIE를 이용한 중합효소 연쇄 반응법은 국내 야생주 HCMV를 신속히 검출하는데 유용한 검사법이다.
Background : Human cytomegalovirus(HCMV) can cause pneumonitis, hepatitis, retinitis and other serious diseases in the immunocompromised patients. It takes 1 to 4 weeks to diagnose HCMV infection by conventional virus culture. Therefore, when HCMV diseases are suspected, a rapid diagnostic method such as polymerase chain reaction(PCR), antigen assay or shell vial culture is desirable. We evaluate the sensitivity and specificity of a PCR for the rapid detection of HCMV wild strains in Korea.
Methods : We used 2 sets of primers ; primer IE and primer MIE derived from the
sequence for immediate early gene of AD169 strain and Towne strain, respectively. Fifteen clinical isolates of HCMV, suspended in MRC-5 cells, were amplified by PCR. Fifteen urine specimens which were positive for HCMV by conventional virus culture were also amplified. Amplification products were analyzed by polyacrylamide gel electrophoresis. The products from PCR with primer IE were also identified by DNA blot hybridization.
Results : PCR using primer IE gave the PCR products in all of the 15 HCMV wild
strains. All of these were hybridized with probe IE. When primer MIE were used,
93%(14/15) of the wild strains showed amplified bands by direct gel analysis. When the urine specimens were amplified by PCR with primer IE, amplified bands were seen in 73%(11/15) by direct gel analysis ; 87%(13/15) by hybridization method. When primer MIE were used, 87%(13/15) of the urine specimens showed the PCR products by direct gel analysis.
Conclusion : Polymerase chain reaction with primer IE and MIE may be a specific and sensitive diagnostic method for rapid detection of HCMV wild strains in Korea.
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