SCOPUS
KCI등재
독성물질 검출을 위한 Plasmid Vector 개발 = Development of Plasmid Vector for Detection of Mutagen
저자
최연주 (umuDC operon부산대학교 자연과학대학 미생물학과) ; 유진삼 (β-galactosidase assay부산대학교 자연과학대학 미생물학과) ; 하진목 (Mutagen detection부산대학교 자연과학대학 미생물학과) ; 백형석 (부산대학교 자연과학대학 미생물학과)
발행기관
학술지명
한국미생물·생명공학회지 (Korean Journal of Microbiology and Biotechnology)
권호사항
발행연도
1997
작성언어
Korean
KDC
570.6
등재정보
SCOPUS,KCI등재
자료형태
학술저널
발행기관 URL
수록면
144-150(7쪽)
제공처
소장기관
E. coli 염색체의 SOS 유전자인 umuDC operon은 DNA가 손상되었을 때 발현이 유도되며 SOS 돌연변이 유발과정에 절대 필수적이다. 이런 특성의 umuDC promoter부분을 lacZ promoter부분에 연결시킴으로써, DNA손상으로 인한 umu의 발현 유도가 lacZ의 발현으로 이어질 수 있도록 재조합 plasmid pBC401과 pBC402를 고안하였으며, 이를 lac 결손균주인 MC1061에 도입시킨 후, 여러가지 돌연변이원을 처리하고 β-galactosidase assay를 실시하여 umu promoter의 작동에 의한 lacZ의 발현 정도를 측정하였다. UV와 MMC 및 NQO를 처리하였을 때는 pBC401의 β-galactosidase 활성이 발현시간의 경과에 따라 급격히 증가하여 3시간 발현점에서 비교적 높게 측정되었으나, MNNG와 EMS를 처리하였을 때는 발현시간이 경과하여도 활성은 큰 변화없이 비교적 낮은 편이었다. pBC402에서도 β-galactosidase 활성이 유도되는 양상은 전반적으로 pBC401과 유사하였으나, 3시간 발현점에서의 β-galactosidase 활성을 비교해 보면, EMS와 MNNG에 대한 감도는 pBC401보다 조금 더 낮아진 편이었고, UV, MMC 및 NQO에 대한 감도는 pBC401보다 조금 더 높아진 것으로 판단되었다. 따라서 재조합 plasmid pBC401과 pBC402을 이용한 돌연변이원의 검색은 염기치환 및 구조이동돌연변이를 복합적으로 야기하는 물질의 검출에 용이할 것으로 생각되며, 검색의 주과정이 β-galactosidase assay이므로 기존의 독성물질 검사법에 비하여 보다 신속한 독성여부의 판단이 이루어질 것으로 기대된다.
After DNA damage, umuDC is the only SOS operon that must be induced to promote SOS mutagenesis in Escherichia coli. The recombinant plasmid pBC401 and pBC402 were constructed to fuse the lac structural genes with promoter region of umuDC operon to induce the expression of lacZ gene by DNA damage. We transformed the plasmid pBC401 and pBC402 into E. coli MC1061, lacZ deleted strain and determined the activity of β-galactosidase for vatious mutagen; UV, mitomycin C (MMC), N-methyl-N^1-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG), 4-nitroqunoline-1-oxide (NQO), ethyl methanesulfonate (EMS). The β-galactosidase activities of pBC401 and pBC401 for UV, MMC, and NQO were increased in proportion to expression time until 3 hours thereafter, the activities were constant or slightly decreased. The activities for MNNG and EMS were not so high as for UV, MMC, and NQO. When MNNG and EMS were treated, β-galactosidase activity of pBC402 was slightly lower than pBC401 but when UV, MMC, and NQO were treated in pBC402, β-galactosidase activity was slightly higher than in pBC401. Therefore, the pBC402 was better than the pBC401 in terms of sensitivity for frameshift mutagen. We suggest that the plasmid pBC401 and pBC402 are easy to detect mutagens which cause frameshift mutation rather than point mutation.
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