양배추 은무늬밤나방의 유약호르몬 에폭시드 가수분해효소의 조직특이성 = Tissue specific juvenile Hormone EPoxide Hydrolase during the Last stadium of the Cabbage Looper, Trichoplusia ni
저자
안기홍 ( Ki Heung Ahn ) ; 오세원 ( Se Won Oh ) ; 이경로 ( Kyung Ro Lee )
발행기관
건국대학교 기초과학연구소(The Research Institute of Basic Sciences Kon-KuK University)
학술지명
권호사항
발행연도
1999
작성언어
Korean
주제어
KDC
405
자료형태
학술저널
수록면
71-79(9쪽)
제공처
유약호르몬 에스테라제와 더불어 유약호르몬의 조절에 중요한 역할을 하는 유약호르몬 에폭시드 가수분해효소를 양배추 은무늬밤나방 종령유충에서 조사, 정제하였다. 이들의 효소활성을 측정하기 위하여 유약호르몬 에스테라제와 유약호르몬 에폭시드 가수분해효소가 포함된 시료에서 유약호르몬 Ⅲ의 대사과정을 분획분석법(partition assay)을 이용하여 조사하였다. 유약호르몬 에스테라제의 저해 제는 3-octylthio-1, 1, 1-trifluoro-2-proparlone (OTFP)을 이용하였고, 기질인 유약호르몬 Ⅲ와 함께 배양하여 가수분해되지 않은 유약호르몬은 isooctane 층에, 분해산물인 유약호르몬 acid, diol 그리고 diol-acid 는 물층으로 분획되어 유약호르몬의 대사과정을 측정하였다. 기질의 농도 5×10-4 M에서 조직별 유 약호르몬 에폭시드 가수분해효소의 활성 측정을 위하여 혈림프, 지방체, 중장, 체벽을 분리하였고, 또한 세포 소분획별로는 세포질, 핵, 미토콘드리아, 마이크로솜을 각각 분리하여 비교하였다. 유약호르몬 에폭시드 가수분해효소 활성이 가장 높은 마이크로솜 단백질을 정제하기 위해 DEAE-sephacel sephacryl S-200, hydroxylapatite column 등 칼럼크로마토그래피법을 이용하여 약 168. 5배의 활성을 가진 유약호르몬 에폭시드 기수분해효소 분획을 얻었다.
더보기Juvenile hormone epoxide hydrolase (JHEH), which may play a pivotal role in regulating insect juvenile hormone (JH) titer along with JH esterase (JHE), was identified in cabbage looPer, Trichoplusia ni A Partition assay was developed to measure insect JH Ⅲ metabolism in biological samples containing both JH esterase and JHEH activity. The assay utilizes commercially available radiochain [3H]-labeled JH as substrate and the selective JH esterase inhibitor 3-octylthio-1, 1, 1, -trifluoro-2-propanone (OTFP). JH partitions into an isooctane phase and the metabolites JH acid, JH diol and JH diol-acid into aqueous methanol after incubation of JH substrate with inhibited and uninhibited sample. In vitro metabolism of JH Ⅲ(5X10-4M) was measured in hemolymph, fat body, midgut and integument homoginate. It was also measured in different subcellular fraction(cytosol, nuclear, mitochondria, microsome)Microsomal Protein was co-purified 168. 5-fold with the JHEH activity through DEAE-sephacel, sephacry S-200 and hydroxylapatite columns.
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