SCOPUS
KCI등재
Yarrowia lipolytica의 Multicopy Integration Vector 개발 = Development of a Multicopy Integration Vector in Yarrowia lipolytica
저자
김정윤 (충남대학교 자연과학대학 미생물학과) ; 우문희 (충남대학교 자연과학대학 미생물학과) ; Dewey D.Y. Ryu (Department of Chemical Engineering, University of California at Davis, CA.)
발행기관
학술지명
한국미생물·생명공학회지 (Korean Journal of Microbiology and Biotechnology)
권호사항
발행연도
1995
작성언어
Korean
주제어
KDC
570.6
등재정보
SCOPUS,KCI등재
자료형태
학술저널
발행기관 URL
수록면
536-543(8쪽)
제공처
소장기관
Multicopy integration vector는 복제수가 많고 non-selective한 환경조건 하에서도 매우 안정되게 유지가 되기 때문에 heterologous 유전자를 발현시키는데 매우 유용한 벡터 시스템이다. Yarrowia lipolytica의 multicopy integration vector를 개발하기 위하여 Y. lipolytica로부터 P-type rDNA를 클로닝하였다. 이 클론된 rDNA의 HindIII-BglII 절편과 promoter 지역을 포함하고 있지 않은 URA3 유전자를 pGEM1 plasmid에 삽입하여 제조한 벡터를 pMIYL-1과 pMIYL-2로 명명하였다. RDNA 절편은 벡터와 chromosomal DNA 사이에 homologous recombination을 유도하기 위한 것이며, promoterless URA3는 불완전한 표지 유전자로서 multicopy integration을 유발시키기 위한 것이다. PMIYL-1은 rDNA의 HindIII-BglII 절편내에 유일한 제한효소 자리로서 KpnI을 가지고 있고, pMIYL-2는 KpnI과 EcoRI을 가지고 있다. 이 벡터들을 Y. lipolytica에 도입한 후에 형질 전환체를 선별하여 copy 수와 안정성을 검사한 결과, 벡터의 copy 수는 5개 이하로 존재하고 non-selective 배지에서도 매우 안정하게 유지가 됨을 알 수 있었다.
Multicopy integration vector is a very useful vector system in that they can be integrated into chromosomal DNA in several copies and stably maintained under non-selective conditions. To develop a multicopy integration vector system in the yeast Yarrowia lipolytica, P-type ribosomal DNA was cloned from Y. lipolytica. A HindIII-BglII fragment of the cloned rDNA and a promoterless URA3 gene were inserted into pGEM1, generating multicopy integration vectors, pMIYL-1 and pMIYL-2. The rDNA fragment is for targeted homologous recombination between the vector and the chromosomal DNA of Y. lipolytica, and the promoterless URA3 gene is a defective selection marker for inducing multicopy integration. pMIYL-1 and pMIYL-2 have an unique restriction enzyme site, KpnI, and two unique restriction enzyme sites, KpnI and EcoRI, repectively, which can be used for targeting of the vectors into the rDNA of Y. lipolytica chromosomal DNA. After transformation of the vectors into Y. lipolytica, copy number and stability were analyzed by Southern hybridization. The vectors were found to be present in less than 5 copies per cell and were stably maintained during growth in non-selective media.
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