Isolation and Purification of Human Interferon-$\alpha$ from Recombinant E. coli by Monoclonal Antibody Column and HPLC Gel Filtration = 단일항체 칼럼과 고압 액체크로마토그래피에 의한 유전자 조작 사람 알파 인터페론의 분리 및 정제
저자
박희섭 ; 정미영 ; 오명석 ; 고중환 ; 김현수 ; 현형환 ; Park, H.S. ; Jung, M.Y. ; Oh, M.S. ; Koh, J.H. ; Kim, H.S. ; Hyun, H.H.
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
1987
작성언어
English
자료형태
학술저널
수록면
336-344(9쪽)
제공처
유전자 조작된 대장균이 생산하는 알파 인터페론을 단일 항체 칼럼을 사용하여 효과적으로 정제하였다. rIFN-$\alpha$에 대한 항체를 생산하는 단일클론 융합세 포를 쥐(BALB/c)의 복강에 접종하여 얻은 복강액으로부터 Protein A column을 사용하여 항체를 정제하였다. 이 정제된 항체를 Affigel-10에 결합시켜 단일항체 칼럼을 만든 후, 유전자 조각 장균을 6M 구아니딘 (guanidine-HCl)으로 처리 하여 얻은 인터페론 포함 상등액을 통과시켜 인터페론을 정제하였다. 정제된 인터페론 $2{\times}10^8\;IU/mg$ protein의 specific activity를 가졌으며 분자량은 SDS-PAGE에서 18,600이었고 30개까지 이이노산 서열을 분석한 결과 천연의 human leukocyte IFN-$\alpha$의 것과 동일하였다. 비환원 조건에서 SDS-PAGE 한 결과 약 15%의 인터페론 이중체 (Interferon dimer)를 포함 하고 있었다. 이를 제거하기 위해 생리식염수 용액으로 사용하여 HPLC 젤여과를 행하였다. 최종 정제된 인터페론을 비환원 조건에서 SDS-PAGE 한 결과 인터페론 단일체의 순도는 99.9% 이상인 것으로 판명되었으며, 최종 정제된 인터페론은 약 5개의 등전 전위점을 갖고 있다 (pI = 6.12, 6.06, 5.85, 5.58, 5.30).
더보기Immunoadsorbent chromatography technique was applied for the efficient purification of Interferon (rIFN-$\alpha$) from recombinant E. coli. Monoclonal antibody to rIFN-$\alpha$ was purified using protein A-Sepharose CL-4B chromatography from ascites fluid of BALB/c mice which were innoculated with monoclonal hybridoma cell. The purified antibody was coupled to Affigel-10, and used as an immunoadsorbent for IFN. The recombinant E. coli cells were sedimented and cell-opening was done using 6 M guanidine-HCl. It was loaded to the above immunoadsorhent column and then the bound IFN was eluted from the column with 0.2 M acetic acid. As a result of purification, the specific activity of the purified IFN was $2{\times}10^8\;IU/mg$ protein and the purification fold was 4100. The amino-terminal sequence of purified IFN was exactly identical to that of natural human leukocyte IFN upto 30 amino acid residues except the 1st and 29th unidentified amino acid residues. The molecular weight of the purified IFN was estimated to be 18,600 by SDS-PAGE. Since IFN purified by monoclonal antibody column contains IFN dimer up to 15%, further purification was done by HPLC gel filtration. The purity of finally-purified IFN monomer was estimated to be more than 99.9% by SDS-PAGE under non-reducing condition. Finally-purified IFN monomer has several pI points (6.12, 6.06, 5.85, 5.58, and 5.30).
더보기서지정보 내보내기(Export)
닫기소장기관 정보
닫기권호소장정보
닫기오류접수
닫기오류 접수 확인
닫기음성서비스 신청
닫기음성서비스 신청 확인
닫기이용약관
닫기학술연구정보서비스 이용약관 (2017년 1월 1일 ~ 현재 적용)
학술연구정보서비스(이하 RISS)는 정보주체의 자유와 권리 보호를 위해 「개인정보 보호법」 및 관계 법령이 정한 바를 준수하여, 적법하게 개인정보를 처리하고 안전하게 관리하고 있습니다. 이에 「개인정보 보호법」 제30조에 따라 정보주체에게 개인정보 처리에 관한 절차 및 기준을 안내하고, 이와 관련한 고충을 신속하고 원활하게 처리할 수 있도록 하기 위하여 다음과 같이 개인정보 처리방침을 수립·공개합니다.
주요 개인정보 처리 표시(라벨링)
목 차
3년
또는 회원탈퇴시까지5년
(「전자상거래 등에서의 소비자보호에 관한3년
(「전자상거래 등에서의 소비자보호에 관한2년
이상(개인정보보호위원회 : 개인정보의 안전성 확보조치 기준)개인정보파일의 명칭 | 운영근거 / 처리목적 | 개인정보파일에 기록되는 개인정보의 항목 | 보유기간 | |
---|---|---|---|---|
학술연구정보서비스 이용자 가입정보 파일 | 한국교육학술정보원법 | 필수 | ID, 비밀번호, 성명, 생년월일, 신분(직업구분), 이메일, 소속분야, 웹진메일 수신동의 여부 | 3년 또는 탈퇴시 |
선택 | 소속기관명, 소속도서관명, 학과/부서명, 학번/직원번호, 휴대전화, 주소 |
구분 | 담당자 | 연락처 |
---|---|---|
KERIS 개인정보 보호책임자 | 정보보호본부 김태우 | - 이메일 : lsy@keris.or.kr - 전화번호 : 053-714-0439 - 팩스번호 : 053-714-0195 |
KERIS 개인정보 보호담당자 | 개인정보보호부 이상엽 | |
RISS 개인정보 보호책임자 | 대학학술본부 장금연 | - 이메일 : giltizen@keris.or.kr - 전화번호 : 053-714-0149 - 팩스번호 : 053-714-0194 |
RISS 개인정보 보호담당자 | 학술진흥부 길원진 |
자동로그아웃 안내
닫기인증오류 안내
닫기귀하께서는 휴면계정 전환 후 1년동안 회원정보 수집 및 이용에 대한
재동의를 하지 않으신 관계로 개인정보가 삭제되었습니다.
(참조 : RISS 이용약관 및 개인정보처리방침)
신규회원으로 가입하여 이용 부탁 드리며, 추가 문의는 고객센터로 연락 바랍니다.
- 기존 아이디 재사용 불가
휴면계정 안내
RISS는 [표준개인정보 보호지침]에 따라 2년을 주기로 개인정보 수집·이용에 관하여 (재)동의를 받고 있으며, (재)동의를 하지 않을 경우, 휴면계정으로 전환됩니다.
(※ 휴면계정은 원문이용 및 복사/대출 서비스를 이용할 수 없습니다.)
휴면계정으로 전환된 후 1년간 회원정보 수집·이용에 대한 재동의를 하지 않을 경우, RISS에서 자동탈퇴 및 개인정보가 삭제처리 됩니다.
고객센터 1599-3122
ARS번호+1번(회원가입 및 정보수정)