KCI등재
SCOPUS
자궁내막기질인 Type I Collagen을 이용한 생쥐 배아의 착상에 관한 연구 = Mouse embryo culture and implantation by Type I Collagen
저자
김정훈(Chung Hoon Kim) ; 채희동(Hee Dong Chae) ; 강병문(Byung Moon Kang) ; 장윤석(Yoon Seok Chang) ; 강은희(Eun Hee Kang) ; 전용필(Yong Pil Cheon) ; 박견(Kyun Park)
발행기관
학술지명
Obstetrics & Gynecology Science(Obstetrics & Gynecology Science)
권호사항
발행연도
2000
작성언어
-주제어
KDC
500
등재정보
KCI등재,SCOPUS,ESCI
자료형태
학술저널
발행기관 URL
수록면
71-75(5쪽)
제공처
목적: Type I collagen을 이용하여 3차원적 배양체계와 유사한 구조적인 환경을 조성하여 생쥐 배아의 착상전후의 상태를 보기 위한 연구를 중심으로 하였다. 연구방법: 포배단계의 배를 획득하기 위해서 자궁과 수란관의 일부를 적출하고 배양액으로 관류하여 배를 획득한 후 실험에 사용하였다. 멸균된 centrifuge용 시험관에 collagen이 polymerization되게 하였다. 배아는 착상과정의 비교를 위하여 type I collagen군(실험군)과 대조군으로 나누었으며, 대조군에서는 type I collagen 없이 배양액만 사용하여 배아를 배양하였다. 배의 성장과 분화는 24시간 단위로 해부현미경하에서 관찰하였다.
결과: 배양 제 3일에 배아의 부착율은 차이가 없었으나, 배아의 크기는 대조군에 비하여 실험군에서 뚜렸하게 컸다. 배아의 성장이 대조군에서 배양용기의 표면을 따라 수평적으로 진행되는 것과는 달리 실험군에서는 구형을 이루며 입체적으로 성장하기 때문에 색깔이 훨씬 진하게 나타났다. 배아의 발달단계를 관찰한 결과 배양 제 4일과 5일에는 실험군에서 대조군에 비하여 유의하게 발달단계가 높았다. 결론: Type I collagen을 사용한 본 연구는 착상연구의 모델로서 실험적으로 원하는 환경을 설정할 수 있고 관찰이 용이한 장점을 보여주었으나, 생체의 자궁내막세포와 같은 dynamic milieu가 결여되어 있어, 실제의 자궁내막과 유사한 체계를 이루는 배양체계를 어느 정도 수준까지 완성하려면 지속적인 연구가 필요할 것으로 사료된다.
Objectives: To examine the in vitro interactions of blastocyst attachment using type I collagen.
Materials and methods: ICR mice were used and follicular growth was stimulated by pregnant mare serum gonadotropin and human chorionic gonadotropin. On day 4 of pregnancy, the uteri were removed and blastocysts were flushed. Mixtures of 1mL sterile water, 0.5mL DMEM, 2mL type collagen solution and 0.5mL 0.1M NaOH were prepared and transferred to an incubator where the collagen solution polymerized. Blastocysts were transferred to dishes previously coated with type I collagen. CMRL 1066 was used as the basic culture medium. It was supplemented with 1mM glutamine and 1mM sodium pyruvate plus 50 IU/ml penicillin and 50 mg/ml streptomycin. During the first 4 days the culture medium was supplemented with 20% fetal calf serum and thereafter with 20% heat inactivated human cord serum. All blastocysts were initially cultured for 2 days without media change. After 2 days, fresh medium was renewed daily. The stages of embryo growth were examined and recorded everyday under a dissecting microscope and classified according to the standard in vivo criteria set forth by Witschi. Results: By 48h, nearly all blastocysts had attached to the surface of collagen pad. Following adhesion to the collagen pad, the blastocysts maintained their 3-dimensional integrity in contrast to control. The embryos in collagen pad were not flattening and kept polarity and spherical shape during culture. The polar trophoblast invaded the type I collagen downward unlike the horizontal growth in control. In the developmental stage of mouse blastocyst, there were significant differences between control and type I collagen group during day 4 and 5 culture. Conclusion: Blastocyst development was better in type I collagen group than control. Therefore, in vitro culture study using type I collagen could provide improved model for the establishment of blastocyst implantation study.
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