SCOPUS
KCI등재
제조합균주 E. coli Ck1092가 생산하는 2,3-Dihydroxybiphenyl Dioxygenase의 정제 및 특성 = Purification and Characterization of 2,3-Dihydroxybiphenyl Dioxygenase from Recombinant E. coli CK1092
저자
박효남 (충북대학교 미생물학과) ; 김영수 (충북대학교 약학과) ; 김영창 (충북대학교 미생물학과) ; 김치경 (충북대학교 미생물학과) ; 임재윤 (충북대학교 미생물학과)
발행기관
한국미생물생명공학회 ( 구 한국산업미생물학회 )(The Korean Society for Applied Microbiology)
학술지명
한국미생물·생명공학회지 (Korean Journal of Microbiology and Biotechnology)
권호사항
발행연도
1996
작성언어
Korean
주제어
KDC
570.6
등재정보
SCOPUS,KCI등재
자료형태
학술저널
발행기관 URL
수록면
282-289(8쪽)
제공처
소장기관
4-CB 분해균주인 Pseudomonas sp. P20으로부터 pcbC 유전자를 클로닝하여 얻은 E. coli CK1092로부터 2,3-DHBP dioxygenase을 분리, 정제하여 효소적 특성을 조사하였다. 효소의 정제는 acetone 침전, DEAE-Se-phadex A-25 ion exchange chromatography, preparative electrophoresis 방법으로 정제하였다. 2,3-DHBP dioxygenase의 분자량은 약 270 kDa으로 추정되며, SDS-PAGE에 의한 분자량은 34 kDa이였다. 따라서, 동일한 subunit 8개 존재하는 octamer로 추정된다. 이 효소는 2,3-DHBP에 대해 높은 기질특이성을 보였으며, 3-methylcatechol, 4-methylcatechol, 4-chlorocatechol에 대해서는 활성을 보이지 않았다. 2,3-DHBP에 대한 Km 값은 18 μM이였으며 30μM 이상의 기질농도에서 활성이 감소하였다. 효소활성의 최적 pH는 8.0이였으며, pH 7.0~10.0 범위에서는 안정하였고, 최적 활성 온도는 40~60℃이며, 60℃까지는 비교적 안정하였다. 또한, 이 효소는 Cu^2+, Fe^2+, Fe^3+ 이온들에 의하여 효소활성이 저해되었고, H_2O_2와 EDTA에 의해서도 활성이 저해되었으며, 10%의 유기용매에 의해서 안정화되지 않았다. 효소활성부위를 알아보기 위해 화학변형제를 처리해 본 결과 tryosine, tryptophan과 histidine이 효소활성에 관여할 것으로 추정된다.
2,3-DHBP dioxygenase was purified from E. coli CK1092 carrying the pcbC gene, which was cloned from 4-chlorobiphenyl-degrading Pseudomonas sp. P20. Purification of this enzyme was done by acetone precipitation, DEAE-Sephadex A-25 ion exchange chromatography, and preparative gel electrophoresis. The molecular weight of subunit was 34 kDa determined by SDS-PAGE, and that of native enzyme was about 270 kDa. It suggests that this enzyme consist of eight identical subunits. This enzyme was specifically active against only 2,3-DHBP as a substrate with 18 μM of Km value, but not catechol, 3-methylcatechol, 4-methylcatechol and 4-chlorocatechol. The optimal pH and temperature of 2,3-DHBP dioxygenase were pH 8.0 and 40~60℃. The enzyme was inhibited by Cu^2+, Fe^2+ and Fe^3+ ions, and was inactivated by H_2O_2 and EDTA. The lower concentrations of some organic solvents such as acetone and ethanol don't stabilize the activity of 2,3-DHBP dioxygenase. The enzyme was completely inactivated by adding the reagents such as N-bromosuccinimide, iodine and p-diazobenzene sulfonic acid.
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