KCI등재후보
상온보관이 가능하며 사용이 편리한 DNA Size-Marker와 저분자량의 DNA 계측을 위한 Size Marker용 플라스미드 개발 = Developments of Ready-Made DNA Size Markers and a Novel Plasmid for a Low Molecular Weight Size Marker
저자
박종구 (계명대학교 의과학연구소)
발행기관
啓明大學校 醫科大學(Keimyung University School of Medicine & Institute for Medical Science)
학술지명
권호사항
발행연도
1998
작성언어
Korean
KDC
510.5
등재정보
KCI등재후보
자료형태
학술저널
수록면
535-541(7쪽)
제공처
소장기관
기존의 수입된 핵산 size markers는 dry ice에 넣어져서 운반되므로 매우 고가이다. 따라서 상온에서 보관될 수 있는 방법을 모색하던 중, 많은 물질의 경우 건조상태를 유지할 때 높은 안정성을 유지한다는 점에 착안했다. DNA는 매우 안정한 물질이므로 그 가능성은 더욱 높다고 가정했다. DNA size markers에 첨가되는 요소를 모두 혼합한 다음 동결건조를 시도해 보았다. 상온과 빛, 상온과 빛 차단 그리고 4℃와 빛 차단의 조건으로 60일간 방치한 후 건조 전 부피의 증류수로 건조체를 이용하여 전기영동 양상을 비교한 결과 DNA size markers의 양 및 질에서 큰 변화가 없었다.
ΦX174 phage DNA는 double strand로 분기가 쉽지않으며 phage의 대량배양도 용이하지 않다. 이러한 문제점을 해결하기 위해 기존의 플라스미드를 변조하여 ΦX174 HaeIII 절단체와 유사한 DNA 분리 양상을 나타내도록 하였다. 개발된 새로운 플라스미드는 column chromatography를 사용하여 분리한 후 제한효소에 의해 효과적으로 절단되었다. 종합하면, 새로운 보관방법과 플라스미드의 개발은 국내에서 양질의 ΦX174 DNA size markers를 적정한 원가로서 개발할 수 있음을 나타낸다.
Molecular biotechnology is a broad research and development principle encompassing basic research as well as applied industrial developments. Biotechnology is expected to become one of the most important research and development sectors in the next century, but the domestic support industry for the field is severely underdeveloped and at best in its infancy. DNA size marker is frequently employed during research in a purpose of extrapolating the relative size of a DNA fragment or measuring the amount of DNA loaded a sample. However, DNA size marker is not developed for commercialization domestically. Further, liquid suspension containing DNA size marker needs to be kept at a low temperature during storage and shipping. In an attempt to maintain the DNA samples at room temperature for extended period of time, lyophilization of DNA with addition of a nuclease inhibitor was studied. Hae Ⅲ digest of ΦX174 phage DNA has been a useful size marker for low molecualr weight DNA molecules, but the double strand RF form of the phage DNA requires laborious procedures for cell culture and purification. A new plasmid was constructed to generate band patterns which can substitute the Hae Ⅲ digest of ΦX174 phage DNA for a comparable purpose. Gel staining dye was also added to the lyophilized DNA to provide additional convenience such that DNA size marker was ready for use by simple reconstitution of distilled water. DNA size marker appears to be advantageous for development as one can judge the quality of the product by direct observation.
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