유지종자 게놈 DNA의 분리에 관한 연구 = Isolation of genomic DNA from oilseeds
저자
김주락 (Faculty of Life Sciences and Resources, Dong-A University) ; 정정한 (Faculty of Life Sciences and Resources, Dong-A University)
발행기관
東亞大學校附設遺傳工學硏究所(The Genetic Engineering Research Institute Dong-A University)
학술지명
권호사항
발행연도
1998
작성언어
Korean
KDC
476.1
자료형태
학술저널
수록면
1-10(10쪽)
제공처
소장기관
일반적으로 고등식물의 DNA 분리시 최종 genomic DNA에 존재하는 polysaccaride류 및 polyphenol류와 같은 물질들은 제한효소 반응이나 PCR 반응 혹은 기타 다른 반응들을 저해하는 요인을 작용해왔다. 따라서 genomic DNA추출액에 존재하는 저해물질을 제거하기 위한 노력의 일환으로 여러 연구자들이 다양한 식물종으로부터 이러한 저해물질들을 제거하는 여러가지 방법을 보고했었다. 본 실험은 식물 genome분석에 있어서 가장 먼저 고려해야 할 양질의 genomic DNA를 이들 식물로부터 분리하는 방법을 개발하고자 이 실험이 수행되었다.
본 실험은 세가지 관점에서 중요성을 두고 실험이 수행되었으며, 그 결과는 다음과 같이 요약되어질 수 있다. 첫째는 게놈 DNA를 추출하는데 가장 중요하게 영향을 미치는 적절한 DNA추출 buffer의 조건에 중점을 두었고, DNA 추출 buffer의 조성은 200 mM Tris-HCI(PH8.5),250 mM NaCI, 1.5%SDS, 10mM EDTA (PH 8.0), 1% Sodium deoxycholate, 1% NP-40(w/v), 5mM thiourea 그리고 10mM DTT로 구성되어질 때 가장 적합하다는 사실을 얻었다. 둘째는 genomic DNA의 분리에 있어 최종 추출액에 존재하는 polysaccharide를 제거시키기위해서는 0.35 volume의 ethanol 이 아주 효과적으로 polysaccharide를 침전시킬 수 있다는 것을 보여주었다. 세번째는 본 실험에 의해 추출된 genomic DNA에 제한효소 buffer가 섞여졌을 때 생기는 불용성물질을 제거하기 위해서는 50mM NaCI과 10mM MgCI2가 첨가되었을때 제한효소 반응을 저해하는 침전물들을 제거할 수 있다는 반응을 저해하는 침전물들을 제거할 수 있다는 사실이 본 실험에서 검증되었다. 이러한 실험을 통해 분리한 genomic DNA를 분광광도계로 측정한 결과 1.6-1.7의 값을 얻었으며, 제한효소 반응과 Southern blotting 분석 결과로 볼때 본 실험에 의해 분리한 genomic DNA가 양질의 DNA라는 사실을 알 수가 있었다. 본 실험방법은 참깨와 들깨의 종자유 뿐만 아니라 polysaccaride류가 다량 함유된 유사한 화학적 구성인자를 지닌 다른 종자 식물에도 적용되어질 수 있을 것이라 기대되어진다.
A reliable method for isolating quality genomic DNA from seeds of sesame (Sesamum indicum L.) and perilla (Perilla frutescens) was developed. The key feature of this method was that polysaccharides and other insoluble materials which have an inhibitory effect on various reactions of plant molecular studies were completely eliminated from the final genomic DNA preparations by treatments of MgCl2, NaCL and ethanol. Our method was very effective for the oilseeds of both plants. Using this method, successful genomic libraries were constructed from the genomic DNA of both sesame and perilla oilseeds.
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