DNA Microarray를 이용한 복합형질유전자재조합 옥수수의 모니터링
저자
발행사항
용인 : 경희대학교, 2011
학위논문사항
학위논문(석사)-- 경희대학교 대학원 : 식품생명공학과 2011. 2
발행연도
2011
작성언어
한국어
주제어
DDC
664 판사항(20)
발행국(도시)
경기도
형태사항
50 p. : 삽도 ; 26 cm
일반주기명
경희대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.
지도교수:김해영
참고문헌 : p.45-50
소장기관
In this study, stacked genetically modified organisms(GMOs) were monitored by DNA microarray technology. For DNA microarray of various stacked GM maize, both construct-specific and event-specific primers were used. For the detection of stacked GM maize, maize endogenous gene (zSSIIb), screening elements (35S promoter, nos terminator) and thirteen kinds of internal gene specific primer pairs were designed. Additional 18S ribosomal RNA specific target was designed as internal positive control and false negative control. Also 17 kinds of probe (30 mers) were attached to the slide glass. And then Microarray chip was produced. In addition, Microarray analysis was performed to distinguish six different stacked GM maize events [GA21×MIR604 (zSSIIb, nos terminator, mcry3A, mepsps), Bt11×GA21×MIR604 (zSSIIb, 35S promoter, nos terminator, mcry3A, mepsps, cry1Ab, pat), MON863×MON810 (zSSIIb, 35S promoter, nos terminator, cry3Bb1, cry1Ab), MON863×MON863 (zSSIIb, 35S promoter, nos terminator, cry3Bb1, cp4epsps), MON863×MON810×NK603(zSSIIb, 35S promoter, nos terminator, cry3Bb1, cp4epsps, cry1Ab)]. Individually inserted gene in the stacked GM maize was amplified by performing the multiplex PCR in a single reaction. And the PCR products were hybridization with seventeen probes into the Microarray chip. Finally, chip image was analyzed by GENEFIX PRO 6.0 program. 39 samples in the markets were selected and monitored by microarray detection. Total 150 grains have been monitored and some grains were identified to different king of GM stacked maize.
더보기본 연구는 DNA microarray 기술을 이용하여 복합형질유전자재조합 옥수수에 대하여 모니터링 한 연구이다. DNA microarray 기술에는 다양한 복합형질유전자재조합 옥수수의 형질을 검출하기 위해서 construct-specific 프라이머와 event-specific 프라이머를 사용하였다. 프라이머는 옥수수 내재유전자인 SSIIb(zSSIIb)와 스크리닝 요소인 35S promoter와 NOS terminator 그리고 현재까지 개발된 복합형질유전자재조합 옥수수가 포함하는 13개의 형질을 검출할 수 있도록 개발되었다. 또한 18S ribosomal RNA 프라이머를 제작하여internal positive control 과 false negative control로 사용하여 총 17개의 형질을 검출하도록 제작되었고, 프로브 역시 17종의 형질을 검출할수 있도록 제작되었다. 프로브는 30bp로 제작하여 슬라이드 글라스에 부착하였다. 본 연구는 5가지 복합형질유전자재조합 옥수수[GA21×MIR604 (zSSIIb, nos terminator, mcry3A, mepsps), Bt11×GA21×MIR604 (zSSIIb, 35S promoter, nos terminator, mcry3A, mepsps, cry1Ab, pat), MON863×MON810 (zSSIIb, 35S promoter, nos terminator, cry3Bb1, cry1Ab), MON863×MON863 (zSSIIb, 35S promoter, nos terminator, cry3Bb1, cp4epsps), MON863×MON810×NK603(zSSIIb, 35S promoter, nos terminator, cry3Bb1, cp4epsps, cry1Ab)]에 대해서 분석을 실시하였다. Multiplex PCR을 수행하여 개별적인 유전자를 동시에 증폭하였고, 증폭산물은 17개의 프로브와 하이브리드를 형성하였다. 마지막으로 제작된 Chip의 이미지를 GENEFIX PRO 6.0 프로그램을 이용하여 분석하였다. 시장에서 구입한 39종의 옥수수 샘플에서 낱알을 선별하여 모니터링 하였다. 총 150개의 낱알에 대해서 모니터링하였으며, 몇몇의 낱알에서는 다른 종류의 복합형질유전자재조합 옥수수로 확인되었다.
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