아데노 바이러스를 이용한 Telomerase-Antisense 발현이 조혈모세포 체외 배양에 미치는 영향 = The Effect of Adenovirus-Mediated Telomerase Antisense Expression in vitro Culture of Hematopoietic Stem Cells
저자
김석진 (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; 김병수 (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; 오상철 (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; 서재홍 (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; 최철원 (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; 신상원 (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; 김열홍 (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; 김준석 (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; 김영태 (고려대학교 의과대학 산부인과학교실) ; 송준석 (고려대학교 의과대학 생명공학 연구소) ; 최은정 (고려대학교 의과대학 BK21 생명과학대학원)
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
2003
작성언어
Korean
주제어
KDC
510.000
자료형태
학술저널
수록면
42-46(5쪽)
제공처
연구배경: 조혈모세포는 자가갱신능 및 분화능을 지니고 있지만, 조혈모세포의 체외배양을 통한 자가갱신을 유도하는 기술 및 정상 혈액세포로 분화, 증식시키는 기술이 개발되어 있지 않고 있다. 그런데, 줄기세포의 자가갱신에 telomerase가 매우 중요한 역할을 수행하고 있음이 알려져 있고 이에 저자 등은 조혈모세포를 telomerase antisense로 처리 후 체외 배양을 하였을 때 어떤 결과가 초래되는지를 알아보고자 본 연구를 시행하였다.
방법: 총 8명의 정상인 골수 공여자에서 채집한 골수혈로부터 단핵구를 분리 후 1×10^(5)/ml의 농도로 LTC-IC 배양을 한 대조군과 단핵구(1×10^(5)/ml)를 telomerase antisense (Adenovirus, 10⁴ PFU/ml, 3 ml) 처리 후 LTC-IC 배양을 한 실험군으로 나누어 양군간의 배양 2주 후 세포 수, 생존율, 그리고 세포모양을 비교, 분석하였다.
결과: LTC-IC 배양 2주에 계산한 세포 수의 경우, 대조군은 1.08±0.19×10⁴/ml인 데 반하여 실험군은 6.75±2.60×10⁴/ml로 통계적으로 유의하게 실험군에서 세포 수가 많았다(P=0.001). LTC-IC 배양 2주에 관찰한 세포 모양의 경우 대조군은 모든 세포들이 일정한 크기로 구형을 유지하고 있었으나 실험군에서는 크기가 서로 상이하고 분화된 세포들이 상당 부분에서 관찰되었다. Tryphan dye로 염색 후 100개의 세포를 관찰하여 염색되지 않은 세포를 생존 세포로 간주하여 그 백분율을 계산하여 보았다. 그 결과 대조군은 83.8±4.8%이고 실험군은 81.1±2.1%로서 통계적으로 유의한 차이는 없었다(P=0.288).
결론: 조혈 모세포를 Telomerase Antisense로 처리 시 분화가 촉진될 가능성을 본 실험을 통하여 확인할 수 있었다. 그러나 본 실험에서는 Telomerase Antisense로 처리 후 LTC-IC 배양으로 증식된 세포들의 성상 하나, 하나를 확인하지 못하였다는 한계가 있었다.
Background: Hematopoieic stem cells are characterized by their ability of self-renewal and differentiation into mature blood cells. Telomerase, which is known as a target of anti-cancer therapy, is also regarded as having possibility of inducing self-renewal of hematopoietic stem cells, and inhibition of telomerase activity might be related with differentiation of hematopoietc stem cells. Thus, we evaluated how telomerase antisense oligonucleotide could affect hematopoietic stem cells in vitro culture.
Methods: We used adenovirus vector containing recombinant antisense telomerase template RNA. Mononuclear cells were obtained from 8 bone marrow donors and divided into two groups. Using the long-term culture system, the experiment group was cultured with treatment of telomerase antisense oligonucleotides, while control group was not. We evaluated the cell number and the degree of differentiation at 2 weeks after LTC-IC culture.
Results: The mean cell number of LTC-IC culture was more higher in the telomerase antisense treatment group than that of control group (6.75×10⁴±2.60/mL vs 1.08×10⁴±0.19/mL). On microscopic examination, the cells of telomerase antisense treatment group showed more differentiation pattern than the group of the control group.
Conclusion: We found that adenovirus-mediated antisense expression of telomerase RNA might influence the differentiation of hematopoietic stem cells. However, further study should be warranted to evaluate its consequences and mechanisms.
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