한천희석법을 이용한 Candida species의 fluconazole 내성선별 = Evaluation of Agar Dilution Method for Determining Fluconazole Resistance of Candida Species

국문 초록 (Abstract)

배경 : 칸디다 감염의 빈도가 증가함에 따라 Candida species의 fluconazole 내성은 점차 중요한 관심이 되고 있다. 그러나 NCCLS법은 fluconazole 내성균을 선별하는데 다소 복잡하고 trailing endpoint도 있어 보통 검사실에서 사용하기 어렵다. 저자들은 fluzonazole이 포함된 한천배지를 이용하여 fluconazole 내성 선별검사를 실시하여 보았다.
방법 : 혈액에서 분리된 총 47주의 Candida species를 대상으로 하였다. 한천희석법은 0, 8 및 16g/mL 농도의 fluconazole이 첨가된 Castione agar와 CHROMagar Candida의 두 종류의 평판 배지를 이용하였다. 한천희석법에서의 fluconazole 내성 성적은 NCCLS법의 결과와 비교하였다.
성적 : NCCLS법에 의해 MIC 16g/mL 이상였던 9주는 Castione 배지를 사용한 한천 희석법의 경우 모두 24시간과 48시간에 100% 내성이 검출되었고, CHROMagar Candida를 이용한 한천 희석법에서는 48시간 배양시에는 모두 내성이 검출되었으나 24시간 배양시엔 1주를 제외한 8주(89%)에서 내성이 검출되었다. NCCLS법에 의한 MIC 1g/mL이하인 33주는 두 종류의 한천희석법에 의해 모두 감수성으로 판정되어 NCCLS법의 성적과 100% 일치하였다. 그러나 MIC 2-8g/mL인 C. guilliermondii등의 5주에서는 두 배지에서의 한천희석법 성적이 다소간의 차이를 보였다. 전체적으로 fluconazole 내성 선별에 있어 한천희석법의 NCCLS법과의 일치율은 Castione agar의 경우 24시간 배양 후 98%(46/47), 48시간 배양 후 94%(44/47)이었고 CHROMagar Candida의 경우, 24시간 배양 후 96%(45/47) 및 48시간 배양 후 91%(43/47)이었다. C. albicans 4주에서 NCCLS 검사에서 trailing endpoint가 관찰되었는데 이 균주들은 fluconazloe이 포함된 평판배지에서는 모두 감수성을 보였다.
결론 : 한천희석법은 간단하며 fluconazole 내성 검출에 있어 NCCLS법과 높은 일치율을 보이며 동시에 trailing endpoint를 보이는 균에서 감수성을 확인할 수 있어 Candida species의 fluconazole에 대한 내성 선별에 좋은 방법으로 생각되었다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Background : With the widespread use of fluconazole in treating and preventing Candida infections, detection of Candida with fluconazole resistance is becoming increasingly important. However, the laborious procedure and trailing endpoints remain problems in fluconazole susceptibility testing by the National Committee for Clinical Laboratory Standards(NCCLS) method. We evaluated simple agar dilution methods for the determining fluconazole resistance of Candida species.
Method : A total of 47 isolates of Candida species isolated from blood cultures was tested. Fluconazole susceptibility testing by the agar dilution method was performed using Casitone agar(AD-Casitone) or CHROMagar Candida (AD-CHROM) wllich contained 0. 8. and 16 g of fluconazole per mL. The results were compared with those by the NCCLS broth macrodilution method.
Results : All nine Candida isolates having fluconazole MICs of > 16 g/mL were correctly determined as > 16 g/mL by AD-Casitone (at 24h and 48h) and AD-CHROM (at 48h). Thrity three isolates with NCCLS MIC (1 g/mL were successfully determined as MIC < 8 g/mL with both AD-Casitone and AD-CHROM. However, five Candida isolates with MIC 2-8 g/mL showed variable results by both agar dilution methods. Overall agreements with the NCCLS method for the screen of fluconazole susceptibility was 98% (46/47) at 24h and 94% (44/47) at 48h in AD-Casitone, and 96% (45/47) at 24h and 91% (43/47) at 48h in AD-CHROM. Testing by both agar dilution method revealed all four isolates which showed trailing-endpoint by the NCCLS, to be susceptible (MIC < 8 g/mL).
Conclusion : The agar dilution method appears to be simple and highly correlate with the NCCLS method and gives a clear MIC endpoint for isolates for which trailing endpoints are found. These suggest that agar dilution method can be an effective screen for determining of fluconazole susceptibility for Candida species.