한우 체외수정란의 동결보존 및 핵이식에 관한 연구 : Ⅰ. 계절 및 배양조건이 한우 체외수정란의 생산에 미치는 영향 Ⅰ. Effects of season and culture condition on production of bovine in vitro fertilization embryos = Studies on Cryopreservation and Nuclear Transplantation of in Vitro Fertilized Bovine Embryos
본 연구는 도살장에서 도살되는 한우의 난소를 적출하여 난소로부터 미성숙 난포란을 회수하는데 있어서 계절별 난포란의 quality과 수정율의 차이점에 대한 규명과 체외성숙-체외수정한 난자를 체외배양기법을 확립하고자 본 실험을 수행하였다.
도살된 한우의 난소로 부터 난포의 크기별로 난포란을 회수하여 체외성숙을 유도하였다. 체외성숙란을 정소상체 미부정자를 이용하여 체외수정을 시킨 후 난관상피세포에서 공배양을 실시하여 수정란의 체외발달을 유도하였으며, 난포란의 계절별 회수율, 체외수정율 및 배양체계에 따른 체외발달율을 조사한 결과는 다음과 같다.
봄(426개), 여름(433개), 가을(419개) 및 겨울(428개) 등 계절별로 분류하여 모두 1,706개의 난소로부터 14,674개의 난포란을 채취하였다. 계절에 따른 1등급 회수율은 22.2(봄), 6.5(여름, 20.6(가을) 및 18.1%(겨울)로써 이들간에 유의적(P<0.05)인 차이는 없었으나 겨울철에 회수한 난자들이 다소 낮게 나타났다. 회수된 2등급 난자의 비율도 봄, 여름, 가을 및 겨울이 각각 43.7, 41.6, 44.1 및 35.2% 로써 계절에 따른 유의적(P<0.05)인 차이가 없었다.
봄, 여름, 가을 및 겨울 등 계절별 체외수정율은 각각 76.0, 80.6, 75.7 및 72.1% 로써 계절에 따른 수정율은 유의적(P<0.05)인 차이가 없었으며, 배반포기 단계까지 발달한 체외수정란은 TCM-199 및 Hams-F10 배양액에 10% FCS와 난관상피세포를 공배양을 실시하였을때는 각각 23.3 및 21.7%의 발달율을 보였으나, TCM-199 배양액에 10%FCS만을 첨가하였을 때는 전혀 발달이 되지 않았다(P<0.05).
본 연구에서는 계절별 회수율의 차이는 많은 요인이 있을 수 있겠으나 주로 계절별 사양관리의 차이 및 계절에 따른 조사료의 공급수준에 의한 영양수준의 차이 등에서 기인되는 것으로 생각된다. 체외수정란의 배반포기로의 발달을 위한 배양조건은 TCM-199 또는 Hams-F10배양액에 10% FCS를 첨가한 배양액으로 난관상피세포와 공배양을 실시하는 것이 효과적인 방법이라고 생각된다.
The present study was carried out to determin the seasonal effects of oocyte collection and culture condition of Korean native cows and in vitro developmental rate of 1VF bovine embryos. The follicular oocytes were collected from small, medium and large follicles, and classified into 4 grades by the morphology of cumulus cells attached and homogenous cytoplasm. They were fertilized in vitro by epididymis spermatozoa treated with heparin for 24 hrs., and then the zygotes were co-cultured in vitro with bovine oviductal epithelial cells for 7 to 9 days. The results obtained were summarized as follows :
The follicular oocytes recovered were classified into grade I 22.2% as spring, 26.5% as summer, 20.6% as autumn and 18.1% as winter. The cleavage rates of the embryos obtained from 76.0(spring), 80.6(summer), 75.5(autumn) and 72.1(winter) respectively(P<0.05). The developmental rates(23.3 and 21.6%)of embryos cultured in TCM 199+10% FCS-OCEM and Harms-F10+10%FCS+OECM up to blastocyst stage were higher(P<0.05) than the TCM-199+10%FCS culture condition(P<0.05)
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