전압, 공핵배 발생단계 및 체외배양액이 소의 제2세대 핵이식배 발생능에 미치는 영향 = Effect of electric pulses, donor cell-stages and culture media on developmental ability of second generation nuclear transplant bovine embryos
저자
정영채 (중앙대학교 산업대학 축산학과) ; 김창근 (중앙대학교 산업대학 축산학과) ; 나광빈 (중앙대학교 산업대학 축산학과) ; 김광식 (중앙대학교 산업대학 축산학과) ; 박세영 (중앙대학교 산업대학 축산학과) ; 류재원 (중앙대학교 산업대학 축산학과) ; 오신애 (중앙대학교 산업대학 축산학과) ; 박진서 (중앙대학교 산업대학 축산학과)
발행기관
中央大學校 遺傳工學硏究所(Institute of Genetic Engineering Chung-Ang University)
학술지명
권호사항
발행연도
1998
작성언어
Korean
KDC
476.1
자료형태
학술저널
수록면
31-37(7쪽)
제공처
소장기관
소에서 체외에서 생산된 제1세대 핵이식배를 다시 공핵배로 사용하여 제2세대 핵이식배를 생산하기 위한 효과적인 방법을 개발하기 위하여 본 연구에서 세포융합시 전압, 제1세대 핵이식배의 발생단계 및 체외배양조건에 따라 제2세대 핵이식배의 발생결과를 조사한 결과는 다음과 같다.
1. 세포융합시 전압을 0.7kV/cm, 1.0kV/cm 및 1.2kV/cm로 하였을 때 세포융합율과 난할율에서 유의차는 없었으며 후기배의 발생율이 1.0kV/cm가 0.7kV/cm와 1.2kV/cm보다 다소 높게 나타났다.
2. 8-15, 16-23 및 25-32세포기의 제1세대 핵이식배를 공핵배로 이용한 제2세대 핵이식배의 융합율, 난할율 및 상실배까지의 발생율은 세포기에 따라 유의차가 없었다. 그러나 배반포배 발생율은 각각 3.4%, 6.9% 및 18.5%로서 16-23세포기와 25-32세포기간에는 유의차가 없었으나 25-32세포기는 8-15세포기보다 유의적으로 높았다(p<0.01).
3. 제2세대 핵이식배를 BOEC, BOEC-CM 및 10% FBS+BOEC-CM에서 배양한 결과 난할율과 상실배까지의 발생에서 큰 차이가 없었으나 배반포까지의 발생율은 각각 12.5%, 5.7% 및 9.6%로 BOEC 처리구에서 처리구가 가장 높은 것으로 나타났다.
This study was carried out to investigate the effect of the electric pulses, donor embryo cell-stages and culture media on the 2nd generation nuclear transplant bovine embryos. Parent donor embryos were used at day 4 after IVF and 8 to 32 cell-stage embryos at day 3∼5 after the first cycle nuclear transfer were used as donor for 2nd generation. The recipient oocytes were enucleated 22 to 23 h after the onset of in vitro maturation(IVM) and preactivated 24 h after IVM. Electric fusion was performed 30 h after IVM. When a pulse of 0.7kV/cm, 1.0kV/cm or 1.2kV/cm direct current for 70μsec was applied, the fusion rates of the 2nd generation were 73.5%, 87.3% and 83.6%, respectively and the cleavage rates were 78.0%, 80.6% and 86.6%, respectively. The proportions of fusion and cleavage were lower in 0.7kV/cm than in 1.0kV/cm and 1.2kV/cm. The developmental rate to blastocyst in the 2nd generation nuclear transplant embryos was higher in 1.0kV/cm(12.9%) than in 0.7kV/cm(8.0%) and 1.2kV/cm(6.5%). The rate of fusion and cleavage and developmental rate to blastocyst in the 2nd generation embryos derived from 8 to 32 cell-stage donor embryos was 87.1%, 85.2% and 18.5%, respectively, from 25-32 cell-stage, 86.6%, 79.3% and 6.9%, respectively, from 16-23 cell-stage, and 84.1%, 77.6%, and 3.4%, respectively, from 8-15 cell-stage. These rates were not significantly different between 25-32 cell-stage and 16-23 cell-stage donor embryos, but the developmental rate was higher from 25-32 cell-stage donor embryos, than from 8-15 cell-stage. The developmental rate to blastocyst in the 2nd generation nuclear transplant embryos was higher in co-culture with bovine oviduct epithelial cells(12.5%) than in BOEC-conditioned medium with 10% FBS(9.6%) or without FBS(5.7%). The developmental rate in co-culture with BOEC was higher than in BOEC-conditioned medium.
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