결핵의 진단법으로서 중합효소 연쇄반응 검사의 가치 = Laboratory Diagnostic Value of Polymerase Chain Reaction Detecting Mycobacterium tuberculosis
저자
서상철 (경북대학교 의과대학 임상병리학교실) ; 은상진 (경북대학교 의과대학 임상병리학교실) ; 김한길 (경북대학교 의과대학 임상병리학교실) ; 송경은 (경북대학교 의과대학 임상병리학교실) ; 서장수 (경북대학교 의과대학 임상병리학교실) ; 최성만 (경북대학교 의과대학 임상병리학교실) ; 이원길 (경북대학교 의과대학 임상병리학교실) ; 김재식 (경북대학교 의과대학 임상병리학교실) ; 김중명 (경북대학교 의과대학 임상병리학교실)
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
1994
작성언어
Korean
주제어
KDC
514.000
자료형태
학술저널
수록면
13-36(24쪽)
제공처
소장기관
목적 : 결핵균 동정을 위한 중합효소 연쇄반응을 임상병리검사로서 적용하기 위한 기초 실험으로 분석학적 예민도와 특이도를 알아보고 검토된 조건에 의한 중합효소 연쇄반응을 실제 임상 가검물에 적용하기 위함이다.
재료 및 방법 : Ziehl-Neelsen염색 양성인 객담, 뢰벤스타인-젠센(Loewenstein-Jensen) 배지에서 분리된 결핵균 및 M. tuberculosis H37Rv를 비롯한 항산균 표준균주 11주와 비항산균 10주를 사용하여 2가지 DNA의 분리법, 3set 프라이머, 3종류 중합효소, 2가지 미량 원심시험관 및 Easy-Cycler^R(Ericomp사, 미국)와 수조형으로 검사를 시행하여 DNA 증폭 산물을 비교하였다. 또한 이미 지일-닐슨 염색법에 의한 선별검사에서 음성을 나타낸 객담 53예, 소변 101예, 삼출액 128예, 뇌척수액 54예 등 총 370예의 임상가검물을 대상으로 하여 위에서 검토된 중합효소 연쇄반응 조건으로 검사한 성적과 지일-닐슨 염색법, 배양법 성적과 비교하였다.
결과 : DNA분리방법 2가지와 3가지 중합효소는 분석학적 예민도와 5fg로 나타나 차이를 발견할 수 없었으며, 프라이머 P1, P2쌍은 예민도가 5fg, 프라이머 INS1, INS2쌍과 프라이머 Pt3, Pt6쌍의 예민도는 0.5fg이었다. Easy-Cycler^R가 수조형에 비해 높고, 미량 원심시험관은 Robbins사 제품이 Sarstedt사 제품에 비해 높은 분석학적 예민도를 나타냈다. 프라이머 P1, P2쌍과 프라이머 INS1, INS2와 Pt3, Pt6 2쌍의 프라이머의 특이도에 있어서는 항산균 표준균주 중 M. tuberculosis H37Rv, M. tuberculosis ATCC 27294, M. bovis ATCC 29312의 3주에서 특이 증폭 띠를 관찰할 수 있었다. 그러나 비결핵성 항산균 8주에는 특이 증폭 띠를 나타내지 않았다. 또 비항산균 10주에도 특이 증폭 띠가 관찰되지 않았다.
따라서 Robbins사의 미량 원심시험관과 proteinase-K법에 의한 DNA분리방법에 Easy-Cycler^R를 사용하여 프라이머 INS1, INS2쌍으로 일차 중합효소 연쇄반응을 시행한 후 프라이머 Pt3, Pt6쌍으로 이차중합효소 연쇄반응을 시행하는 방법을 370예의 임상가검물에 시행하였고 지일-닐슨 염색법과 결핵균배양검사도 동시에 시행한 결과 중합효소 연쇄반응 양성은 106예(28.6%), 배양 양성은 27예(7.3%) 및 염색 양성은 18예(4.9%)였으며, 결핵환자는 141명(38.1%)였다.
370예의 임상 가검물로 시행한 중합효소 연쇄반응의 진단학적 예민도와 특이도, 양성결과 예측치 및 음성결과 예측치는 68.8%, 96.1%, 91.5% 및 83.3%로 각각 나타났다.
결론 : 결핵균 동정을 위한 중합효소 연쇄반응은 배양검사에 비해 신속하며, 분석학적인 예민도와 특이도가 뛰어나므로 결핵 진단을 위한 임상병리검사로서 유용하다고 사료됨.
In this study, We investigated the optimal conditions of polymerase chain reaction(PCR) assay for the rapid identification of Mycobacterium tuberculosis in clinical specimens as routine laboratory test.
So we have compared two DNA isolation methods, 3 polymerases, 2 set of primer, 2 kinds of thermocycler and 2 microtubes. We evaluated two DNA isolation methods, bead-beating method and proteinase-K method, the latter was more sensitive than the former. In comparision of two sets of primers, P1 and P2 primers detecting 123-base pair fragment of IS6110 made from Biosnthesis(U. S. A.) and INS1 and INS2 primers detecting 245-base pair fragment of IS986 showed equally sensitive results ie. 5fg. Specificity of primers were tested and INS1 and INS2 primers gave 245-base pair product from M. tuberculosis H37Rv, M. tuberculosis ATCC 27294 and Mycobacterium bovis ATCC 29312 but not from 8 nontuberculous mycobacterial strains such as M. kansasii ATCC 12478, M. terrae ATCC 15755, M. intracellurae ATCC 13950, M. avium ATCC 25281, M. gordonae ATCC 14470, M. fortuitum ATCC 6841, M. smegmatis ATCC 19420, M. scrofulaceum ATCC 19981. Coagulase-positive staphylococcus, coagulase-negative staphylococcus, streptococcus, Esccherichia coli, Serra-tia marcescens, Klebsiella pneumoniae, Enlerobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Acinetobacter calcoaceticus, Pseudomonas aerugonosa showed no 245-base pair amplification product. PCR by the P1 and P2 primers showed 123-base pair amplification product from M. tuberculosis H37Rv, M. tuberculosis ATCC 27294 and Mycobacterium bovis ATCC 29312 but not from 8 nontuberculous mycobacterial strains such as M. kansasii ATCC 12478, M. terrae ATCC 15755, M. intracellularae ATCC 13950, M. avium ATCC 25281, M. gordonae ATCC 14470, M. fortuitum ATCC 6841, M. smegmatis ATCC 19420, M. scrofulaceum ATCC 19981. Coagulase-postive staphylococcus, coagulase-negative staphylococcus, streptococcus, Escherichia coli, Serratia marcescens, Klebsiella pneumoniae, Enlerobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Acinelobacler calcoaceticus, Pseudomonas aeruginosa showed no 123-base pair amplification product. In comparision of polymerase, Taq DNA polymerase^R(Promega Co., U. S. A.) was more cost effective than Ampli Tag^R(Perkin-Elmer Cetus, U. S. A.), but these two were equally sensitive and specific in the detection of M. tuberculosis-specific DNA. Tac polymerase (Korea'Biotech, Korea) showed many nonspecific bands. In comparision of thermocycler, Easy-Cycler^R(Ericomp, U. S. A.) was more sensitive than water-bath type and in that of microtubes Robbin's were more sensitive than Sarstedt's
PCR results were compared with results of culture for M. tuberculosis and Ziehl-Neelsen stain in 370 clinical specimens that were negative by initial Ziehl-Neelsen stain. There were 27 specimens(7.3%) that were positive for M. tuberculosis by culture, 18(4.9%) specimens that were positive by Ziehl-Neelsen stain, and 106 specimens(28.6%) that were positive for PCR and 141 cases that were positive for tuberculosis. Overall sensitivity, specificity, positive predictive value and negative predictive value were 68.8, 96.1, 91.5 and 83.3% respectively, for PCR; 19.1, 100, 100, and 66.8%, respectively for culture; and 12.8, 100, 100, and 59.0% respectively for Ziehl-Neelsen stain.
분석정보
서지정보 내보내기(Export)
닫기소장기관 정보
닫기권호소장정보
닫기오류접수
닫기오류 접수 확인
닫기음성서비스 신청
닫기음성서비스 신청 확인
닫기이용약관
닫기학술연구정보서비스 이용약관 (2017년 1월 1일 ~ 현재 적용)
학술연구정보서비스(이하 RISS)는 정보주체의 자유와 권리 보호를 위해 「개인정보 보호법」 및 관계 법령이 정한 바를 준수하여, 적법하게 개인정보를 처리하고 안전하게 관리하고 있습니다. 이에 「개인정보 보호법」 제30조에 따라 정보주체에게 개인정보 처리에 관한 절차 및 기준을 안내하고, 이와 관련한 고충을 신속하고 원활하게 처리할 수 있도록 하기 위하여 다음과 같이 개인정보 처리방침을 수립·공개합니다.
주요 개인정보 처리 표시(라벨링)
목 차
3년
또는 회원탈퇴시까지5년
(「전자상거래 등에서의 소비자보호에 관한3년
(「전자상거래 등에서의 소비자보호에 관한2년
이상(개인정보보호위원회 : 개인정보의 안전성 확보조치 기준)개인정보파일의 명칭 | 운영근거 / 처리목적 | 개인정보파일에 기록되는 개인정보의 항목 | 보유기간 | |
---|---|---|---|---|
학술연구정보서비스 이용자 가입정보 파일 | 한국교육학술정보원법 | 필수 | ID, 비밀번호, 성명, 생년월일, 신분(직업구분), 이메일, 소속분야, 웹진메일 수신동의 여부 | 3년 또는 탈퇴시 |
선택 | 소속기관명, 소속도서관명, 학과/부서명, 학번/직원번호, 휴대전화, 주소 |
구분 | 담당자 | 연락처 |
---|---|---|
KERIS 개인정보 보호책임자 | 정보보호본부 김태우 | - 이메일 : lsy@keris.or.kr - 전화번호 : 053-714-0439 - 팩스번호 : 053-714-0195 |
KERIS 개인정보 보호담당자 | 개인정보보호부 이상엽 | |
RISS 개인정보 보호책임자 | 대학학술본부 장금연 | - 이메일 : giltizen@keris.or.kr - 전화번호 : 053-714-0149 - 팩스번호 : 053-714-0194 |
RISS 개인정보 보호담당자 | 학술진흥부 길원진 |
자동로그아웃 안내
닫기인증오류 안내
닫기귀하께서는 휴면계정 전환 후 1년동안 회원정보 수집 및 이용에 대한
재동의를 하지 않으신 관계로 개인정보가 삭제되었습니다.
(참조 : RISS 이용약관 및 개인정보처리방침)
신규회원으로 가입하여 이용 부탁 드리며, 추가 문의는 고객센터로 연락 바랍니다.
- 기존 아이디 재사용 불가
휴면계정 안내
RISS는 [표준개인정보 보호지침]에 따라 2년을 주기로 개인정보 수집·이용에 관하여 (재)동의를 받고 있으며, (재)동의를 하지 않을 경우, 휴면계정으로 전환됩니다.
(※ 휴면계정은 원문이용 및 복사/대출 서비스를 이용할 수 없습니다.)
휴면계정으로 전환된 후 1년간 회원정보 수집·이용에 대한 재동의를 하지 않을 경우, RISS에서 자동탈퇴 및 개인정보가 삭제처리 됩니다.
고객센터 1599-3122
ARS번호+1번(회원가입 및 정보수정)