KCI등재
Cloning and Expression of Human Clotting Factor 9 cDNA in Escherichia coli = 인체 혈액응고 9인자 cDNA cloning 및 Escherichia coli 에서의 발현
저자
Young-Won Lee(이영원) ; Hyang-Suk Hur(허향숙) ; Myoung-Hee Kim(김명희)
발행기관
대한의생명과학회(The Korean Society For Biomedical Laboratory Sciences)
학술지명
권호사항
발행연도
1996
작성언어
English
주제어
KDC
510
등재정보
KCI등재
자료형태
학술저널
발행기관 URL
수록면
231-240(10쪽)
제공처
소장기관
인체 혈액 응고 9인자는 간에서 생성되며 461개의 아미노산으로 구성된 당단백질이다. 따라서 인체 혈액응고 9인자 cDNA를 찾기 위해 태아의 간(fetal liver) cDNA library를 PCR(Polymerase Chain reaction) 방법으로 screening 하였으며, 그 결과 ATG개시 코돈으로부터 TAA 종료 코돈까지 포함하는 1.4 kb의 9인자 cDNA를 찾았다. 또한 클론된 9인자 cDNA를 박데리아에서 발현시키기 위해 박테리아 발현 벡터인 pGEX-2T 플라스미드에 클로닝하므로써 pGEX-F9 플라스미드를 제조하였다. pGEX-F9로 형질전환된 E. coli에서 pGEX-F9의 발현을 유도하면 73 KDa 크기의 GST-factor9 융합 단백질이 다량 생성되며, 이 단백질이 혈액 응고 9인자 단백질을 함유하는 융합 단백질임을 혈액 응고 9인자 항체를 이용한 Western blot으로 입증하였다. E. coli에서 발현된 GST-factor 9 융합단백질은 전체 단백질의 약 20%를 차지하며, GST agarose bead를 이용한 one step purificarion 방법을 통해 GST-factor9 융합 단백질을 쉽게 분리할 수 있다.
더보기Human blood clotting (coagulation) factor 9 cDNA which codes for 461 amino acid has been cloned by screening human fetal liver cDNA library using PCR. This 1.4 kb cDNA spanning from the ATG initiation codon to the TAA termination codon was cloned into bacterial expression vector pGEX-2T, generating pGEX-F9 plasmid. The plasmid pGEX-F9 expresses about 73 kDa GST (Glutathione S-transferase)-Factor 9 fusion protein when introduced into E. coli. Western blot analysis using polyclonal antibody raised against human factor 9 confirmed this fusion protein contains factor 9 protein. The level of GST-factor 9 expression was about 20% of total protein and the purification of fusion protein was efficiently achieved by using GST agarose bead based on one step purification protocol.
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