KCI등재
SCIE
SCOPUS
Construction of a High-Quality Yeast Two-Hybrid Library and Its Application in Identification of Interacting Proteins with Brn1 in Curvularia lunata
저자
Gao, Jin-Xin ; Jing, Jing (Shanghai Jiaotong University) ; Yu, Chuan-Jin ; Chen, Jie
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
2015
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English
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등재정보
KCI등재,SCIE,SCOPUS
자료형태
학술저널
발행기관 URL
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108-114(7쪽)
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9
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제공처
Curvularia lunata is an important maize foliar fungal pathogen that distributes widely in maize growing area in China, and several key pathogenic factors have been isolated. An yeast two-hybrid (Y2H) library is a very useful platform to further unravel novel pathogenic factors in C. lunata. To construct a high-quality full length-expression cDNA library from the C. lunata for application to pathogenesis-related protein-protein interaction screening, total RNA was extracted. The SMART (Switching Mechanism At 5' end of the RNA Transcript) technique was used for cDNA synthesis. Double-stranded cDNA was ligated into the pGADT7-Rec vector with Herring Testes Carrier DNA using homologous recombination method. The ligation mixture was transformed into competent yeast AH109 cells to construct the primary cDNA library. Eventually, a high qualitative library was successfully established according to an evaluation on quality. The transformation efficiency was about $6.39{\times}10^5$ transformants/$3{\mu}g$ pGADT7-Rec. The titer of the primary cDNA library was $2.5{\times}10^8cfu/mL$. The numbers for the cDNA library was $2.46{\times}10^5$. Randomly picked clones show that the recombination rate was 88.24%. Gel electrophoresis results indicated that the fragments ranged from 0.4 kb to 3.0 kb. Melanin synthesis protein Brn1 (1,3,8-hydroxynaphthalene reductase) was used as a "bait" to test the sufficiency of the Y2H library. As a result, a cDNA clone encoding VelB protein that was known to be involved in the regulation of diverse cellular processes, including control of secondary metabolism containing melanin and toxin production in many filamentous fungi was identified. Further study on the exact role of the VelB gene is underway.
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연월일 | 이력구분 | 이력상세 | 등재구분 |
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2023 | 평가예정 | 해외DB학술지평가 신청대상 (해외등재 학술지 평가) | |
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2008-01-01 | 평가 | 등재학술지 유지 (등재유지) | KCI등재 |
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2003-01-01 | 평가 | 등재학술지 선정 (등재후보2차) | KCI등재 |
2000-07-01 | 평가 | 등재후보학술지 선정 (신규평가) | KCI후보 |
기준연도 | WOS-KCI 통합IF(2년) | KCIF(2년) | KCIF(3년) |
---|---|---|---|
2016 | 1.14 | 0.32 | 0.84 |
KCIF(4년) | KCIF(5년) | 중심성지수(3년) | 즉시성지수 |
0.69 | 0.57 | 0.477 | 0.17 |
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