소 난포란의 체외성숙도가 수정 및 체외발달에 미치는 영향 = Effects of In Vitro Oocyte Age on the Fertilization and Development with Bovine Follicular Oocyte
본 연구소는 소 난포란을 이용하여 체외수정시에 체외성숙 시간이 체외수정 및 체외발달에 미치는 영향을 조사하고자 실험을 수행하였다.
도살장에서 도살된 한우의 난소를 채취하여 실험실로 2시간 이내에 운반하여 난소를 깨끗이 세척한 후 18 gauge needle로 난포의 크기별로 난포란을 회수하여 10% FCS가 첨가된 TCM-199 배양액에 FSH(35 ㎍/ml), LH(10㎍/ml), estradiol-17β(1㎍/ml)가 첨가된 체외성숙용 배양액에서 20-28시간 동안 체외성숙을 유도하였다. 체외성숙란을 한우 동결정액을 이용하여 체외수정을 시킨 후 난관상피세포에서 공배양을 실시하여 수정란의 체외발달을 유도하였으며, 난포란의 등급별 회수율과 체외성숙시간에 따른 수정율 및 체외발달율을 조사한 결과는 다음과 같다.
난소에서 난포의 크기에 따른 Grade I의 회수율은 소, 중 및 대난포에서 각각 31.3, 27.8 및 3.7%였으며, 48개의 난소로 부터 모두 398개의 미성숙 난자를 회수하여 난소당 8.3개의 미성숙 난자를 회수하였다. 등급별로는 2.3, 2.5, 2.3 및 1.2%의 회수율을 보였다.
체외수정란의 배반포로의 발달율은 24시간 성숙시켰을 때 27.2%로서 20(11.6%) 및 28(9.0%)시간 성숙시켰을 때 보다 유의적(P<0.05)으로 높았다. 그러나 22, 24 및 26시간 성숙시켰을 때는 성숙시간에 따른 발달율은 유의적(P<0.05)인 차이가 없었다.
The ovaries of Korean native cow or heifers were obtained from an abattoir and kept on 28-30℃ and transported to laboratory within 2 hrs. The follicular oocytes were collected from small, medium and large follicles, and classified into 3 grades by the morphology of cumulus cells attached and homogenous cytoplasm. The oocytes were matured in vitro for 24 hrs. in TCM-199 supplemented with 35㎍/ml FSH, 10㎍/ml LH, 1㎍/ml estradiol-17β and granulosa cells at 39℃ under 5% CO_2 in air. They were fertilized in vitro by freezing sperm treated with heparin for 24 hrs., and then the zygotes were co-cultured in vitro with bovine oviductal epithelial cells for 7 to 9 days.
The follicular oocytes recovered were classified into 41.7% as gradae Ⅰ, 51.5% as grade Ⅱ and 6.8% as grade Ⅲ. The number of oocytes recovered per ovary was averaged 8.3 and they were classified into 2.3 as grade Ⅰ, 2.5 as grade Ⅱ and 2.3 as grade Ⅲ.
The cleavage rates of the embryos obtained from 73.3, 78.4, 80.4, 77.3 and 72.7% in the groups of maturation age of 20, 22, 24, 26 and 28 hours respectively. The in vitro culture of bovine embryos with maturation age from 22-26 hours improved significantly(P<0.05) the subsequent development to transferable embryos(20.4-25.0%), compared with 20 hours(11.6%) or 28 hours(9.0%).
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