CC Chemokine CKβ8의 발현 조절 물질 탐색 및 저해활성 물질 분석 = Secreening and Analysis of Transcriptional Inhibitors for Human CC Chemokine CKβ8 Gene
CKβ8은 CC 케모카인의 부류에 속하는 사이토카인의 일종으로, 단핵구, 호염구, 호산구, T 림프구, 자연살해세포, 수지상세포 등의 화학주성물질로 작용하는 것으로 알려져 있다. CKβ8은 염증반응 및 혈관신생 등과 같은 여러 가지 생체 반응에 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 본 논문에서는 사람 CKβ8 유전자의 전사저해 물질을 선별하기 위하여 CKβ8/Luc 유전자를 발현하는 세포주를 확립하였다. CKβ8 유전자의 전사시작점에서 -299 부터 +10 프로모터 부위를 PCR에 의해 얻은 다음 포유세포 발현 플라스미드에 클로닝하였다. CKβ8/Lvc 유전자는 U937 세포내에서 PMA에 의해 10배 이상 발현이 증가한다. CKβ8/Luc 발현 U937 세포주는 식물 추출물에서 전사 저해제를 탐색하는데 이용되었다. 46 개의 식물 추출물 중에서 6개가 90% 이상 CKβ8/Luc의 전사를 저해하였다. 이들 물질에 대해 세포 독성 실험을 수행한 결과 그 중 한 개만이 세포 독성이 거의 없는 것으로 나타났다. 이 추출물은 붉나무에서 얻은 추출물이며 이 식물 추출물은 염증관련 질환에 대한 가능성이 있는 치료제로 이용될 수도 있을 것으로 추측된다.
더보기Ckβ8 belongs to a family of CC chemokines, which is known to act as a chemoattractant for monocytes, basophils, eosinophils, T lymphocytes, NK cells, and dendritic cells. CKβ8 is known to play roles in various biological processes such as inflammation and angiogenesis. In the present study, we developed U937 cell line expressing CKβ8/Luciferase fusion gene for screening of transcriptional inhibitors for human CKβ8 gene. Genomic sequences that contain CKβ8 promoter region from 299 to+10 nucleotide from the transcription start site was amplified by PCR and cloned into mammalian episomal plasmid. The CKβ8/Luc fusion plasmid was introduced into human promonocytic U937 cells and selected for stable U937 cells expressing the fused reporter gene. The expression of the fusion gene was induced by more than 10 folds upon treatment of phorbol myristate acetate. The stable U937 transfectant cells were used for searching transcriptional inhibitors for human CKβ8 gene from plant extracts. Among 46 plant extracts tested, six extracts exerted more than 90% inhibition of PMA-induced CKβ8 transcription. Cytotoxic tests demonstrated that one of extracts, which was extracted from Rhus chinensis Mill, had little cytotoxic effect. The extract may be used for developing a potential therapeutic agent for inflammatory diseases.
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