glpD and glpE 유전자의 조절영역 결손변이주기가 전사조절에 미치는 영향 = Effects of deletion mutants in the regulatory region of transcriptional regulation glpD and glpE genes.
저자
정희태 (동아대학교 농과대학 농화학과) ; 정수열 (동주여자전문대학 식품영양과) ; 최용락 (동아대학교 농과대학 농화학과)
발행기관
東亞大學校附設遺傳工學硏究所(The Genetic Engineering Research Institute Dong-A University)
학술지명
권호사항
발행연도
1996
작성언어
Korean
주제어
KDC
476.1
자료형태
학술저널
수록면
63-70(8쪽)
제공처
소장기관
glpD와 glpE는 같은 조절 영역 하에서 121 bp 간격을 두고 역방향으로 전사되어지며, 이들 유전자 상류영역에 존재하는 하나의 CRP binding site가 두 유전자의 전사 조절에 관여함을 이미 여러 연구를 통하여 확인되어졌다.
본 연구에서는 glpD와 glpE의 조절영역이 다양한 크기로 결손된 변이주를 작성하였다. 각 변이된 promoter의 발현조절 영향을 보고자 LacZ와의 융합 plasmid를 작성하였고, β-galactosidase 활성을 측정하여 cAMP에 의한 발현조절을 검토하였다.
발현조절 특성을 확인한 결과 CRP binding site 전까지 결손이 된 변이주는 wild와 비슷한 활성이지만 CRP bin-ding site가 없어진 변이주의 경우는 promoter 활성이 크게 감소했고 cAMP에 의한 발현조절은 나타내지 않았다. 한편 CRP의 공통배열을 삽입시키면 회복이 가능하였다. glpE의 조절영역도 glpD와 마찬가지로 다양하게 결손시킨 변이주를 작성하여 promoter 조절활성을 확인한 결과 CRP binding site가 없어진 변이주의 경우는 promoter 활성이 크게 감소하였으며, 결손된 CRP 결합영역을 삽입시키니 cAMP에 의한 전사촉진이 거의 회복되어졌다.
The glpD gene encoding gly-3-p dehydrogenase is essential for the aerobic growth of E. coli on glycerol or gly-3-p. The glpE gene, the function of which is unknown, is transcribed divergently with respect to glpD gene. Expression of the adjacent but divergently transcribed glpD and glpE genes is positively regulated by the cAMP-CRP complex.
In this study, for a precise investigation of the functional elements in the regulatory region for transcription activation by cAMP-CRP, deletion mutation have been introducted into the regulatory region.
The effect of the deletion mutant on transcriptional regulation was tested in vivo by β-galctosidase activity. Deletion mutants in the regulatory region of glpD demonstrated that the presence of the CRP-binding site resulted in an sixfold increase in promoter activity. And also deletion mutants of glpE gene demonstrated that the presence of the CRP-binding site resulted in an eightfold increase in promoter activity.
Insertion of 22 bp oligomer in the deletion mutants has shown that the CRP binding site is need for maximal expression of glpD and glpE genes.
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