Staphylococcus epidermidis로부터 단백질 분해효소 유전자의 Cloning과 동정 = Cloning and Characterization of Protease from Staphylococcus epidermidis
저자
이현환 (한국외국어대학교 미생물학과)
발행기관
한국외국어대학교 외국학종합연구센터 부설 기초과학연구소(Institute of Basic Sciences Center for Foreign Studies)
학술지명
권호사항
발행연도
1996
작성언어
Korean
주제어
KDC
404
자료형태
학술저널
수록면
211-221(11쪽)
제공처
소장기관
사람의 피부로부터 Staphylococcus epidermidis를 분리하고 동정하였다. 이 균을 skim milk를 함유한 배지에 배양 하였을 때 colony 주위에 투명한 환(clear zone)을 보임으로서 체외 분비성 단백질 분해효소를 생성하는 것으로 밝혀졌다. 이 protease의 최적 pH가 7.0인 것으로 보아, neutral protease였다. 한편 이 균은 tetracycline에 대한 내성을 보이는데, 이는 7-8 Kb의 cryptic plasmid에 있는 내성 유전자에 기인하는 것으로 밝혀졌다. 이 균으로부터 단백질 분해효소 유전자를 shot-gun 방법에 의해 cloning하고 그 유전자를 동정하였다. 그 결과 3개의 재조합 플라스미드(recombinant plasmid)를 선별하였으며, 이들을 각각 pMG301, pMG302, pMG303으로 명명하였다. 이들 plasmid들은 각각 2.6Kb, 1.8Kb and 4.4Kb의 절편을 가지고 있었다. 한편 이 재조합 플라스미드들의 유전자 지도를 작성하였으며, 이로부터 단백질 분해효소를 coding하는 유전자의 정확한 위치를 찾기 위하여 subcloning을 시도하였다.
The strain Staphylococcus epidermidis, isolated from the human skin in our laboratory, was characterized. The strain showed a clear zone on the agar medium containg 1% skim milk. The fact revealed that the strain produced some protease into the medium. The protease production was closely related with the growth of the cells. The optimal activity of the protease was found at pH 7.0, indicating the protease is neutral. The strain has cryptic plasmid of 7∼8 Kb long. The cryptic plasmid conferred the resistance against the tetracycline. To study the role of protease of the S. epidermidis in the infection process, three protease gene was cloned and characterized. 3 transformants which showed clear zone around the colonies were screened and selected. Each plasmid isolated from the colonies, named a pMG301, pMG302 and pMG303, has the 2.6Kb, 1.8Kb and 4.4Kb of foreign DNA fragmant, respectively. To determine the exact position of protease gene, the gene was deleted. subcloned and characterized.
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