KCI등재
흰쥐에서 반복적 스트레스가 신경활성 스테로이드의 GABAA 수용체 조절작용에 미치는 영향 = The Effect of Repeated Stress on the Modulation of Neuroactive Steroids at the ??-Benzodiazepine Receptor Complex in Rats
연 구 :
신경활성 스테로이드는 대뇌피질 세포막의 GABAA 수용체 복합체에서 GABAA 수용체 효현제 양상으로 작용하여 [³H]flunitrazepam이 GABAA 수용체에 결합하는 항진 작용이 관찰되었으나, 반복적으로 신경활성 스테로이드를 처치한 세포에서는 이러한 신경활성 스테로이드의 [³H]flunitrazepam 결합 항진효과가 소실되었다는 보고가 있었다. 이에 본 연구에서는 반복적인 스트레스에 부하된 흰쥐를 사용하여 신경활성 스테로이드의 GABAA 수용체에 대한 배위자(ligand)의 결합반응 양상을 정상 실험동물과 비교, 관찰하여 보고자 하였다.
방 법 :
본 연구에서, 벤조다이아제핀 수용체 결합반응(receptor binding assay)을 위한
[3H]flunitrazepam 결합반응을 위해서는 GF/B 여과지(Whatman) 상에서 Brandel M-24R을 사용하여 측정했고, GABAA 수용체 결합반응 (receptor binding assay)을 위한 [3H]muscimol 결합반응에서는 각 시험관 당 100㎕의 대뇌피질 조직(약 0.32mg 단백에 해당)을 사용하였으며, 상기 벤조다이아제핀 수용체 결합반응과 동일한 실험방법을 실시하였다.
결 과 :
신경활성 스테로이드인 pregnanolone은 대뇌피질 세포막의GABAA수용체 복합체에 대한 [³H]flunitrazepam 결합반응을 항진시켜 GABAA 수용체 효현제 양상으로 작용하는 것으로 관찰되었다. 또 pregnanolone이 GABAA 수용체 복합체상의 GABA 결합부위에 대한 결합력을 알아보기 위하여 GABAA 수용체 효현제인 [³H]muscimol 결합반응을 실시하였을 때 pregnanolone은 50%정도의 억제율을 보여주는 GABA와는 그 결과가 다르게 [³H]muscimol 결합반응을 억제하지 않음으로써. muscimol과 경쟁적으로 같은 결합부위에 작용하지 않는다는 것을 보여주었다. 또 반복적인 부동화 스트레스에 부하된 흰쥐의 대뇌 피질조직을 사용하여 pregnanolone의 [³H]flunitrazepam 결합반응을 관찰하였을 때, 대조군에 비하여 pregnanolone의 [³H]flunitrazepam 결합 항진작용이 감약되는 것을 관찰하였다.
결 론 :
이상의 결과로부터 반복적인 스트레스에 부하된 흰쥐의 대뇌피질조직에서는 정상 흰쥐에 비하여, pregnanolone이 GABA성 신경전달에 미치는 항진작용이 감약되었으며, 이는 반복적인 스트레스와 연관된 불안장애의 정신생리 규명에 중요한 정보라고 사료된다.
Objectives : Pregnanolone is a potent positive modulator of the γ-aminobutyric acid(GABA) response that enhances the binding of [³H]flunitrazepam to the GABAA receptor. Recently, it was reported that chronic treatment with pregnanolone uncouples allosteric interactions between steroid and benzodiazepine recognition sites. The present study was designed to assess the effect of repeated stress on the modulation of neuroactive steroids on the GABAA receptor.
Methods : The effect of steroids on the ligands binding to GABAA receptor was investigated using cerebral cortices of unstressed and repeatedly immobilized rats. Male Sprague-Dawley rats, weighing 200-250g were forced to suffer an immobilization stress for 2 hours.
Results : Pregnanolone enhanced the binding of [³H]flunitrazepam to GABAA receptor in both of unstressed and repeatedly stressed rats. However, repeatedly stressed rats showed significantly higher values in EC50 and lower values in Emax of enhancement binding of [³H]flunitrazepam than those of unstressed rats.
Conclusions : From these findings, it can be concluded that repeated stress reduced the positive modulation of neuroactive steroid no the GABAA-receptor complex.
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