담도 폐쇄증 환아의 간경변 조직에서 유전자 발현의 변동 = A Catalogue of Gene Expression Difference in Biliary Cirrhosis due to Biliary Atresia Using Differential Expressed Sequence Tags(EST) Screening
목적:간외 담도 폐쇄증은 소아영역에서 간이식의 적응증으로 가장 많은 부분을 차지하는 질환으로 서 발생원인은 아직 밝혀져 있지 않으며, 간외 담도의 진행성 소실을 설명하기 위한 많은 가설이 제시되어 있으나 증명되지 않았다.따라서 담도 폐쇄증의 원인과 발생과정을 이해하고 조기 진단을 위해 발생과 진행,간섬유화 등에 관여하는 가능한 유전자의 규명은 매우 의미있는 시도이다.
방법:인간 모유두 새포로부터 구축한 cDNA ilbrary를 이용하여 dot blot panel을 제작하였다.
생체부분 간이식 수술시 환아가 간경변 조직과 공여자의 정상 간조직을 얻은 후 각각의 조직으로부터 RNA를 분리한 후 역전사하여 cDNA를 얻었다.rendom primed DNA labelling방법을 이용하여 방사능 동위원소를 붙임으로써 방사능 표지된 cDNA probe를 만들었다.membrane을 30분간 prehybridization 시킨 후 1시간 동안 hybridization 시켰다.reverse dot hybridization 결과 담도 폐쇄성 간경변 조직과 정상 간 조직에서 차이나는 클론을 확인하고 해당 클론의 핵산 염기서열을 분석하였다.그 결과를 BLAST를 이용하여 GenBank의 database와 비교 검색함으로써 선택된 클론이 기존의 어느 유전자와 상동성을 가지는지 확인하였다.
결과:담도 폐쇄성 간경병 조직에서 발현이 증가한 유전자는 26종으로서 bcl-w,laminin binding protein, hepatocyte growth factor-regulated tyrosine kinase substrate(HRS), tymosin β-4,10,transforming growth factor(TGF)-β, tissue inhibitor of metalloproteinase(TIMP)-1,signal recognition particle(SRP)4, eukaryotic initiation factor(eIF)-2 α kinase,lysyl oxidase, aldolase A, γ-glutamylcystein synthetase,collagen typeⅠ α1,2,collagen typeⅢ, fibronectin, osteonetin, insulin-like growth factor binding protein(IGFBP)2,3 등이었다.담도 폐쇄성 간경변 조직에서 발현이 감소한 유전자는 gastrula zinc finger protein과 novel gene:K0059 이었다.
결론:이 연구는 담도 폐쇄증과 간섬유화의 특이유전자 규명으로 담도 폐쇄증과 간섬유화의 원인규명에 기여하고 질환의 조기 발견과 간경화의 치료와 예방 물질의 개발을 위한 기초 자료가 될 것으로 생각한다.
Purpose: Extrahepatic biliary atresia is the most common indication for liver transplantation in children.
Serveral studies have been explain the destructive, inflammatory process leading to fibrosis and obliteration of the biliary tract, but the etiology of this disorders remains unknown.
It would be very significant to identify genes that are specifically expressed in pathologic liver tissue of biliary atresia and analyze the pattern of expression in those genes.
Method: We made dot blot panels consisting of 1,730 different EST(expressed sequence tags) clones which were isolated from human hair dermal papilla cell cDNA library.Liver tissues were taken from a recipient with biliary atresia and a normal donor during living-related liver transplantation.Total RNA was extracted from each sample and reversely transcribed to make cDNA.
Then radioablelled cDNA probe pools were made by random primed DNA labeing method and used for screening differentially expressed genes using EST dot blot panel.
Results: Among the total of 1,730 EST clones, 26 cDNA clones were overexpressed in biliary cirrhosis.They revealed homology to genes encoding bcl-w, laminin binding protein, hepatocyte growth factor-regulatef tyrosine kinase substrate(HRS),thymosin β-4, 10; transforming growth factor(TGF)-β, tissue inhibitor of metalloproteinase(TIMP)-1, signal recognition particle(SRP)4, eukaryotic initiation factor(eIF)-2αkinase, lysyl oxidase, aldoase A, γ-glutamylcystein synthetase, collagen typeⅠα1,2,collagen typeⅢ,fibronectin,osteonectin,insulin-like growth factor binding protein(IGFBP)-2,3,and more.
In addition, the expression of 2 clones ahowed that gastrula zinc finger protein and one novel gene were decreased in biliary atresia.
Conclusions: This study identified differential EST screening technique.We believe this studt could lead to a better understanding of the pathogenesis of biliary atresia and hepatic fibrosis.(J Korean Pediatr Soc 1999;42:1-10)
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