KCI등재
Adenosine Deaminase 표지유전자로 형질전환된 연초의 신속한 Assay 방법 = Visible and Fast Assay System for Tobacco Transformant Introduced with Adenosine Deaminase Marker Gene
Adenosine deaminase 유전자를 연초의 형질전환용 표지유전자로 활용할 때 형질전환체 여부를 매우 빠르고 눈으로 직접 색깔을 확인할 수 있는 새로운 방법이 개발되었다. ADA 효소는 독성인 adenosine 유도체를 비독성인 inosine 유도체와 암모니아로 변환시키는데, 이때 형성된 암모니아를 phenol-nitoprusside와 alkaline-hypochlorite 용액을 이용하여 청색으로 변환시켜 96 well plate상에서 1시간 내에 형질전환체 여부를 쉽게 확인할 수 있게 되었다. ADA효소의 substrate로서 9-D-arabinofuranosyl adenine, cordycepin, 2'-deoxyadenosine, adenosine and xylofuranosyl adenine이 모두 가능하였으며, substrate 용액의 최적조건은 adenosine 10 mM과 pH 7.5이었다. 특히 형질전환체는 ADA효소의 inhibitor인 deoxycoformycin이 함유되어 있는 용액 속에서는 adenosine을 inosine과 암모니아로 변환시키지 못해 색깔의 변화가 없었는데, 이는 형질전환체에서 색깔의 변화는 ADA효소의 작용 때문에 일어나는 것을 의미한다. 따라서 본 연구결과는 ADA 표지유전자가 도입된 형질전환체의 확인에 있어서 GUS gene system과 같이 눈으로 직접 확인할 수 있을 뿐만 아니라 매우 작은 크기의 형질전환체 절편으로 쉽고, 빠르면, 값싸게 확인할 수 있게 되었다.
더보기New visible and fast assay system have been developed for tobacco transformant introduced with adenosine deaminase (ADA) marker gene, which converts cytotoxic adenosine analogues to non-toxic inosine analogues and ammonia. Ammonia was changed to blue color in the solution of phenol-nitoprusside and alkaline-hypochlorite. It was possible to detect activity of ADA visibly on the holes of 96 well plate using tiny explant of transgenic tobacco leaves within 1 hour incubation time. As substrates of ADA enzyme from transgenic plant on the plate, a number of adenosine analogues such as 9-D-arabinofuranosyl adenine, cordycepin, 2'-deoxyadenosine, adenosine and xylofuranosyl adenine were possible for detection of ADA activity. Optimal condition of substrate for ADA enzyme was each 10 mM and pH 7.5 in adenosine solution. Especially, transgenic plant did not convert adenosine to inosine and ammonia in the presence of ADA inhibitor deoxycoformycin, which means that ammonia produced from transgenic plant is due to expression of ADA gene. Now, we show that this detection system can be easily, sensitively, fast and cheaply as well as visibly assayed in vitro as GUS gene system with very small size of transformant explant.
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